Diferența dintre microscopia cu fluorescență cu transmisie și microscopia cu fluorescență prin reflexie
1. Microscop cu fluorescență cu transmisie: Sursa de lumină de excitație este transmisă prin materialul specimenului printr-un condensator pentru a excita fluorescența. Concentratoarele de câmp întunecat utilizate în mod obișnuit, sau concentratoarele obișnuite, pot fi utilizate pentru a regla reflectorul pentru a converti lumina de excitație și lumina laterală pe specimen. Acesta este un microscop cu fluorescență relativ demodat. Avantajul său este fluorescența puternică la mărire scăzută, în timp ce dezavantajul său este că fluorescența sa slăbește odată cu creșterea măririi. Prin urmare, este mai bine pentru observarea materialelor specimene mai mari.
2. Microscop cu fluorescență cu fascicul în cădere: Acesta este un nou tip de microscop cu fluorescență care s-a dezvoltat în timpurile moderne. Spre deosebire de cea precedentă, lumina de excitație cade din lentila obiectiv pe suprafața specimenului, folosind aceeași lentilă obiectiv ca și condensatorul de iluminare și lentila obiectiv pentru colectarea fluorescenței. Un separator de fascicul de culoare dublă trebuie adăugat la calea optică, care formează un unghi de 45 de grade cu fotouraniul. Lumina de excitație este reflectată în lentila obiectivului și se adună pe eșantion. Fluorescența generată de probă și lumina de excitație reflectată de suprafața lentilei obiectivului și a sticlei de acoperire intră simultan în lentila obiectivului și revin la separatorul de fascicul cu două culori, separând lumina de excitare și fluorescența. Lumina de excitație reziduală este apoi absorbită de filtrul de blocare. Dacă sunt utilizate diferite combinații de filtre de excitație, separatoare de fascicule cu două culori și filtre de blocare, acestea pot satisface nevoile diferitelor produse de reacție fluorescente. Avantajele acestui microscop fluorescent sunt iluminarea uniformă a câmpului vizual, imagini clare și fluorescență mai puternică cu o mărire mai mare.
Avantajele și dezavantajele microscopiei cu fluorescență cu transmisie
Sursă de lumină: lampă cu mercur de înaltă presiune sau lampă cu halogen.
Oglindă cu reflectoare: Folosirea unui reflector cu câmp întunecat pentru a separa excitația și fluorescența.
Lentila obiectiv: Se poate folosi orice tip de lentila obiectiv.
Specimen: specimenele subțiri sunt mai potrivite pentru observarea transmisiei.
Avantaje: ① Datorită utilizării unui condensator de câmp întunecat, lumina de excitație nu poate pătrunde în lentila obiectivului, ceea ce face ușoară formarea unui fundal întunecat și obținerea unui contrast bun, iar orice lentilă obiectiv poate fi folosită pentru observare. ② Când utilizați un obiectiv cu mărire redusă, acesta este mai luminos decât un microscop cu fluorescență reflectorizant.
Dezavantaj: Centrul și înălțimea reflectorului trebuie reglate corect, altfel nu se poate obține o imagine fluorescentă strălucitoare. Datorită limitării distanței focale a spotului în câmp întunecat, lamele groase de sticlă nu pot fi utilizate. Zona de iluminare a câmpului vizual nu trebuie să fie prea mare, altfel poate cauza estomparea culorii fluorescente a specimenului fluorescent. Exemplarele groase sau opace nu sunt potrivite.
