Parametrii tehnici și abilitățile de utilizare a microscopului cu fluorescență
Parametrii tehnici ai microscopului cu fluorescență 1. Ocular cu unghi larg 2. Lentila obiectiv acromatic 3. Convertor lentilă obiectiv cu patru găuri 4. Dispozitiv de fluorescență în cădere Albastru (B) Verde (G) Sistem de excitare 100W lampă cu mercur 5. Coaxial grosier mecanism de microfocalizare: interval de focalizare 15 mm Valoare micro grilă 0,002 mm 6. Banc de lucru mecanic cu două straturi interval de mișcare longitudinală: 70 mm Interval de mișcare laterală: 50 mm
Parametrii tehnici ai microscopului cu fluorescență
1. Ocular cu unghi larg
2. Obiectiv acromatic
3. Convertor obiectiv cu patru găuri
4. Dispozitiv de fluorescență în cădere Albastru (B) Verde (G) Sistem de excitare Lampă cu mercur de 100 W
Mecanism coaxial de microfocalizare grosieră: interval de focalizare: 15 mm, valoarea microgrilei: 0,002 mm
6. Banc de lucru mecanic cu două straturi
Interval de mișcare longitudinală: 70 mm Interval de mișcare laterală: 50 mm
Sfaturi și metode pentru utilizarea microscopiei cu fluorescență
（1） Slide
Grosimea diapozitivei trebuie să fie între 0,8 și 1,2 mm. Dacă diapozitivul este prea gros, pe de o parte, absoarbe prea multă lumină și, pe de altă parte, nu poate determina adunarea luminii de excitație pe specimen. Lama trebuie să fie netedă și curată, cu o grosime uniformă și fără fluorescență spontană semnificativă. Uneori sunt necesare lame de sticlă de cuarț.
（2） Sticlă de acoperire
Grosimea geamului de acoperire este de aproximativ 0,17 mm și este netedă și curată. Pentru a spori excitația, se poate folosi și sticlă de acoperire pentru interferență. Acesta este un strat de sticlă special acoperit cu mai multe straturi de substanțe (cum ar fi fluorură de magneziu) care au efecte de interferență diferite pe diferite lungimi de undă de lumină. Poate permite fluorescenței să treacă fără probleme, reflectând în același timp excitația, care poate excita proba.
（3） Specimen
Secțiunile de țesut sau alte specimene nu trebuie să fie prea groase. De exemplu, dacă sunt prea groase, cea mai mare parte a luminii de excitație este consumată în porțiunea inferioară a specimenului, în timp ce porțiunea superioară observată direct de lentila obiectiv nu este suficient de excitată. În plus, suprapunerea celulelor sau mascarea impurităților pot afecta judecata.
（4） Agent de montaj
Glicerina este folosită în mod obișnuit ca agent de montare și trebuie să fie lipsită de fluorescență spontană, incoloră și transparentă. Luminozitatea fluorescenței este mai strălucitoare la pH 8,5 până la 9,5 și nu este ușor să se estompeze rapid. Prin urmare, un amestec echivalent de glicerol și soluție tampon de carbonat 0,5 mol/l cu un pH de 9,0 până la 9,5 este utilizat în mod obișnuit ca agent de montare.
（5） Ulei pentru oglindă
În general, atunci când utilizați un microscop cu fluorescență în câmp întunecat și un microscop cu ulei pentru a observa specimenele, este necesar să utilizați ulei pentru lentile. Cel mai bine este să utilizați un ulei special pentru lentile non-fluorescent, care poate fi înlocuit și cu glicerolul menționat mai sus. Se poate folosi și parafină lichidă, dar indicele de refracție este scăzut, ceea ce are un impact ușor asupra calității imaginii.
