Care sunt componentele structurale speciale ale unui microscop fluorescent?
Blocul de filtru color este o parte importantă a unui microscop cu fluorescență, iar componentele sale centrale constau dintr-un prim filtru de barieră pentru lumina de excitație, un al doilea filtru de barieră pentru lumina de emisie și o oglindă de separare a fasciculului. Modelele de filtre de culoare și numele diverșilor producători sunt adesea inconsecvente.
1. Filtru de lumină de excitație și filtru de lumină de emisie: Pe baza caracteristicilor sursei de lumină și a pigmentului fluorescent, următoarele trei tipuri de potrivire sunt de obicei selectate pentru a furniza lumină de excitare într-un anumit interval de lungimi de undă și pentru a permite fluorescenței excitate de probă să treacă și să ajungă la ocular pentru imagistica.
Excitație UV: filtrul de lumină de excitare poate permite trecerea luminii UV și blochează trecerea luminii vizibile de peste 400 nm. Filtrul corespunzător de emisie de lumină permite trecerea luminii albastre, iar lumina din câmpul vizual pare albastră, cum ar fi atunci când este aplicată la colorarea DAPI.
Excitarea luminii albastre: filtrul luminii de excitație poate permite luminii albastre să treacă și blochează lumina de la alte lungimi de undă. Filtrul corespunzător de emisie de lumină permite trecerea luminii verzi, cum ar fi markerii de colorare GFP.
Excitarea luminii verzi: filtrul luminii de excitație permite trecerea luminii verzi și blochează lumina de la alte lungimi de undă. Filtrul corespunzător de emisie de lumină permite de obicei trecerea luminii roșii, cum ar fi colorarea cu Rodamină.
2. Filtru de culoare semitransparent și semireflectorizant: Funcția sa este de a bloca complet trecerea luminii de excitație și de a o reflecta; Și emit lumină în intervalul corespunzător de lungimi de undă. Modelul său corespunde filtrului de lumină de excitație și filtrului de lumină de emisie.
(2) Obiectiv și ocular
Pot fi aplicate diverse lentile obiective, dar cel mai bine este să alegeți lentile cu scară adăugată și reducere a aberației cromatice, deoarece auto-fluorescența lor este extrem de scăzută și performanța lor de transmisie a luminii (gama de lungimi de undă) este potrivită pentru fluorescență. Datorită faptului că luminozitatea de fluorescență a unei imagini în câmpul microscopului este direct proporțională cu pătratul raportului de deschidere al lentilei obiectiv și invers proporțională cu mărirea acesteia, pentru a îmbunătăți luminozitatea imaginilor cu fluorescență, ar trebui utilizată o lentilă obiectiv cu un raport de deschidere mai mare. În special pentru specimenele cu fluorescență insuficientă, trebuie utilizată o lentilă obiectiv cu un raport de deschidere ridicat și o transmisie mare a luminii, însoțită de un ocular cu cea mai mică mărire posibilă.
(3) Alte dispozitive optice
Stratul reflectorizant al unei oglinzi este de obicei acoperit cu aluminiu, deoarece aluminiul absoarbe mai puțin lumina ultravioletă și vizibilă în regiunea albastru violet, reflectând peste 90% (în timp ce argintul are o reflectivitate de doar 70%). În general, se folosesc oglinzi plate. Lentila de focalizare, special concepută și fabricată pentru microscoape cu fluorescență, este realizată din sticlă de cuarț sau altă sticlă care transmite lumina ultravioletă. Dispozitivul de lumină în cădere, pe lângă faptul că are funcția de sursă de lumină transmisivă, este mai potrivit pentru observarea directă a specimenelor opace și semi-transparente, cum ar fi plăci groase, membrane filtrante, colonii bacteriene, culturi de țesuturi și alte probe. În ultimii ani, multe tipuri noi de microscoape cu fluorescență au fost dezvoltate folosind un dispozitiv de lumină în cădere, cunoscut sub numele de microscop cu fluorescență cu lumină în cădere.
(4) Sursă de lumină
În zilele noastre, lămpile cu mercur de{0}}înaltă presiune de 50 sau 100W sunt utilizate în mod obișnuit ca surse de lumină. În timpul funcționării, descărcarea are loc între doi electrozi, determinând evaporarea mercurului și creșterea rapidă a presiunii din interiorul sferei (acest proces durează de obicei aproximativ 5-15 minute). În timpul acestui proces, cuante de lumină sunt emise, iar lungimea de undă a luminii eliberate este suficientă pentru a excita diferite substanțe fluorescente. Prin urmare, este utilizat pe scară largă în microscoapele cu fluorescență.
Durata de viață a lămpilor cu mercur este relativ scurtă, de obicei 200 de ore. Ca răspuns la această limitare a duratei de viață, în ultimii ani, un nou tip de sursă de lumină fluorescentă X-Cite a fost utilizat pe scară largă, cu o durată de viață super lungă a becului de 2000 de ore și utilizare flexibilă - fără preîncălzire necesară, gata de utilizare.
