Care sunt avantajele microscopiei laser confocale
În comparație cu microscoapele tradiționale cu câmp larg, microscopia confocală cu scanare cu laser are caracteristicile de înaltă definiție, rezoluție înaltă și sensibilitate ridicată. Este utilizat pe scară largă în domeniul biomedicinei și a devenit un instrument de imagistică important în acest domeniu. De ce poate obține confocal atât de multă dragoste și ce avantaje are? Acest articol enumeră trei aspecte pentru a discuta avantajele confocalului.
Colectați semnalul doar pe planul focal, făcând imaginea clară de neclaritate
Deci, cum obține microscopia confocală acest avantaj? Acest lucru se datorează hardware-ului confocal-cheie - orificiul, așa cum se arată în Figura 2. Este o gaură mică în fața detectorului și plasată pe planul optic conjugat cu planul focal al probei. Când lumina de excitație iradiază proba, atât planul focal, cât și planul non-focal al zonei probei vor fi excitați pentru a genera semnale de fluorescență, ajustați dimensiunea corespunzătoare a orificiului (de obicei 1 Au), astfel încât semnalul de fluorescență pe planul focal (linia punctată verde) pot fi semnale fluorescente (linii punctate roșii și albastre) care trec prin orificiu pentru a ajunge la detector din planul focal, nu pot ajunge la detector prin orificiu. Prin adăugarea de găuri hardware, confocalul poate obține imagini clare și de înaltă calitate fără a schimba metoda de realizare a microscoapelor cu fluorescență obișnuite.
Datorită existenței pinhole-ului, putem achiziționa semnalul doar pe planul focal și obținem o imagine bidimensională de înaltă rezoluție. Prin ajustarea continuă a poziției axei Z, pot fi obținute imagini bidimensionale la diferite poziții ale axei Z și pot fi obținute o serie de imagini continue de „slice optică”. După obținerea acestor felii optice, modulul 3D echipat cu software-ul instrumentului poate fi folosit pentru a reconstrui imaginea 3D pentru a construi o imagine 3D clară. Această colecție nedistructivă, continuă de imagini optice secțiuni realizează funcția de „CT al celulei”.
Precizia rezultatelor de colocalizare este strâns legată de rezoluția imaginii, așa că trebuie să alegem o metodă de imagistică cu rezoluție mai mare atunci când efectuăm experimente de colocalizare. În comparație cu microscoapele tradiționale, microscopia confocală a devenit un instrument puternic pentru cercetarea de colocalizare datorită avantajelor sale de înaltă rezoluție.
Datorită existenței limitei de difracție, rezoluția optică confocală convențională este în jur de 200 nm. Când trebuie să observăm structuri mai mari de 200 nm, confocalul poate determina cu exactitate gradul de colocalizare. Dacă este necesară analiza de colocalizare, poate fi selectat modulul de analiză de colocalizare echipat în software-ul confocal.
