Două metode de observare microscopică frecvent utilizate
1, Observarea câmpului întunecat
Câmpul vizual întunecat este de fapt iluminare în câmp întunecat. Caracteristicile sale sunt diferite de câmpul vizual luminos, deoarece nu observă direct lumina iluminatoare, ci mai degrabă observă lumina reflectată sau difractată a obiectului inspectat Prin urmare, câmpul vizual devine un fundal întunecat, în timp ce obiectul inspectat prezintă o imagine strălucitoare.
Principiul câmpului întunecat se bazează pe fenomenul optic Tyndall, în care particulele de praf nu pot fi observate de ochiul uman atunci când sunt expuse la lumină puternică din cauza difracției cauzate de lumina puternică. Dacă lumina este proiectată oblic pe acesta, particulele par să crească în volum datorită reflectării luminii, făcându-le vizibile pentru ochiul uman
Accesoriul special necesar pentru observarea câmpului întunecat este un reflector în câmp întunecat. Caracteristica sa este că nu permite razului de lumină să treacă prin obiect de jos în sus, ci modifică calea luminii pentru a fi îndreptată oblic către obiect, astfel încât lumina de iluminare să nu intre direct în lentila obiectivului și să folosească imaginea strălucitoare formată de reflexia sau difracția luminii pe suprafața obiectului întunecat, rezoluție mult mai mare decât în câmpul de observare. observare în teren, ajungând până la 0,02-0,004
2, metoda de inspecție a oglinzii cu contrast de fază
Invenția cu succes a microscopiei cu contrast de fază în dezvoltarea microscoapelor optice este o realizare importantă în tehnologia modernă de microscopie. Știm că ochiul uman poate distinge doar lungimea de undă (culoarea) și amplitudinea (luminozitatea) undelor luminoase. Pentru specimenele biologice incolore și transparente, când trece lumina, lungimea de undă și amplitudinea nu se schimbă mult, ceea ce face dificilă observarea specimenului într-un câmp luminos
Microscopul cu contrast de fază utilizează diferența de lungime a căii optice a obiectului inspectat pentru inspecția în oglindă, utilizând eficient fenomenul de interferență al luminii pentru a transforma diferența de fază care nu poate fi distinsă de ochiul uman într-o diferență de amplitudine distinsă. Chiar și substanțele incolore și transparente pot deveni clar vizibile. Acest lucru facilitează foarte mult observarea celulelor vii, prin urmare microscopia cu contrast de fază este utilizată pe scară largă în microscoapele inversate.
Principiul de bază al microscopiei cu contrast de fază este de a converti diferența de cale optică a luminii vizibile care trece prin specimen în diferență de amplitudine, îmbunătățind astfel contrastul dintre diferitele structuri și făcându-le clare și vizibile. Dacă diferența de cale optică este mărită sau micșorată cu încă 1/4 λ, diferența de cale optică devine 1/2 λ, iar interferența dintre cele două fascicule de lumină crește sau scade după ce axa este combinată, îmbunătățind contrastul Din punct de vedere al structurii, microscoapele cu contrast de fază au două
diferențe speciale față de microscoapele optice obișnuite:
1. O diafragmă inelară este situată între sursa de lumină și condensator, iar funcția sa este de a forma un con gol de lumină care trece prin condensator și se concentrează asupra specimenului
2. Placă de fază unghiulară: O placă de fază acoperită cu fluorură de magneziu este adăugată lentilei obiectivului, care poate întârzia faza luminii directe sau difractate cu 1/4 λ. Poate fi împărțit în două tipuri:
(1) . Placă de fază A+: Întârzie lumina directă cu 1/4 λ și adaugă cele două seturi de unde luminoase după combinarea axelor. Amplitudinea crește, iar structura specimenului devine mai strălucitoare decât mediul înconjurător, formând un contrast luminos (sau contrast negativ)
(2) . Placa de fază B+: Întârzie lumina difractată cu 1/4 λ și scade undele luminoase după combinarea axelor a două seturi de raze luminoase, rezultând o scădere a amplitudinii și formând un contrast întunecat (sau contrast pozitiv). Structura devine mai întunecată decât mediul înconjurător
