Principiile și caracteristicile structurale ale microscoapelor cu fluorescență
Microscopul cu fluorescență folosește o sursă de lumină punctiformă foarte eficientă pentru a emite o anumită lungime de undă a luminii (cum ar fi lumina ultravioletă 3650 sau lumina albastră violet 4200) printr-un sistem de filtru color ca lumină de excitație, care excită substanțele fluorescente din specimen pentru a emite diferite culori de fluorescență și apoi observă prin mărirea lentilei obiectivului și a ocularului. În acest fel, chiar și cu fluorescență slabă pe un fundal puternic, este ușor de recunoscut și are o sensibilitate ridicată. Este folosit în principal pentru studiul structurii, funcției și compoziției chimice celulare. Structura de bază a unui microscop cu fluorescență este compusă dintr-un microscop optic obișnuit și unele accesorii, cum ar fi o sursă de lumină fluorescentă, filtru de excitație, separator de fascicul cu două culori și filtru de blocare. Sursa de lumină fluorescentă - utilizează de obicei lămpi cu mercur de ultra-presiune ultra-înaltă (50-200 W), care pot emite lumină de diferite lungimi de undă, dar fiecare substanță fluorescentă are o lungime de undă a luminii de excitație care produce cea mai puternică fluorescență. Prin urmare, filtrele de excitație (de obicei filtre de excitație ultraviolete, violete, albastre și verzi) trebuie adăugate pentru a permite doar o anumită lungime de undă a luminii de excitație să treacă și să iradieze specimenul, absorbind în același timp toate celelalte lumini. După ce a fost iradiată cu lumină de excitație, fiecare substanță emite fluorescență vizibilă cu o lungime de undă mai mare decât lungimea de undă de iradiere într-o perioadă foarte scurtă de timp. Fluorescența are specificitate și este în general mai slabă decât lumina de excitație. Pentru a observa fluorescența specifică, în spatele lentilei obiectivului trebuie adăugat un filtru de blocare (sau de suprimare).
Funcțiile sale sunt duble: în primul rând, să absoarbă și să blocheze intrarea luminii de excitație în ocular pentru a evita perturbarea fluorescenței și deteriorarea ochilor; în al doilea rând, pentru a selecta și a permite fluorescența specifică să treacă, prezentând o culoare fluorescentă specifică. Două tipuri de filtre trebuie utilizate în combinație.
