Diferența dintre microscopia confocală fluorescentă și laser
microscop cu fluorescență
1. Microscopul cu fluorescență este un dispozitiv care folosește lumina ultravioletă ca sursă de lumină pentru a ilumina obiectul testat, făcându-l să emită fluorescență și apoi să observe forma și poziția obiectului la microscop. Microscopia cu fluorescență este utilizată pentru a studia absorbția, transportul, distribuția și localizarea substanțelor în interiorul celulelor. Unele substanțe din celule, cum ar fi clorofila, pot emite fluorescență după ce au fost expuse la radiații ultraviolete; Este posibil ca unele substanțe în sine să nu emită fluorescență, dar dacă sunt colorate cu coloranți fluorescenți sau anticorpi fluorescenți, pot emite și fluorescență sub radiații ultraviolete. Microscopia cu fluorescență este unul dintre instrumentele cercetării calitative și cantitative asupra acestor substanțe.
2. Principiul microscopului cu fluorescență:
(A) Sursă de lumină: sursa de lumină emite lumină de diferite lungimi de undă (de la ultraviolet la infraroșu).
(B) Sursă de lumină cu filtru de excitare: transmiterea luminii cu o anumită lungime de undă care poate produce fluorescență în specimen, în timp ce blochează lumina care este inutilă pentru fluorescența excitației.
(C) Specimenele fluorescente: în general colorate cu pigmenți fluorescenți.
(D) Filtru de blocare: transmite selectiv fluorescența prin blocarea luminii de excitație care nu a fost absorbită de eșantion, iar unele lungimi de undă sunt, de asemenea, transmise selectiv în fluorescență. Un microscop care folosește lumina ultravioletă ca sursă de lumină pentru a emite fluorescență de la obiectul iradiat. Microscopul electronic a fost asamblat pentru prima dată de Knorr și Harroska în Berlin, Germania în 1931. Acest tip de microscop folosește un fascicul de electroni de mare viteză în loc de un fascicul de lumină. Datorită lungimii de undă mult mai scurte a fluxului de electroni în comparație cu undele luminoase, mărirea microscopului electronic poate ajunge la 800000 de ori, cu o limită de rezoluție minimă de 0,2 nanometri. Microscopul electronic cu scanare, care a început să fie folosit în 1963, permite oamenilor să vadă structurile minuscule de pe suprafața obiectelor.
3. Domeniul de aplicare: Folosit pentru a mări imaginile obiectelor mici. Folosit în general pentru observarea biologiei, medicinei, particulelor microscopice etc.
microscop confocal
1. Un microscop confocal adaugă o lentilă semireflectorizantă pe calea luminii reflectate, care îndoaie lumina reflectată care a trecut deja prin lentilă în alte direcții. Există un deflector cu un orificiu la punctul său focal, iar gaura mică este situată la punctul focal. În spatele deflectorului este un tub fotomultiplicator. Se poate imagina că lumina reflectată înainte și după punctul focal al luminii de detectare nu poate fi focalizată pe gaura mică prin acest sistem confocal și va fi blocată de deflector. Deci fotometrul măsoară intensitatea luminii reflectate la punctul focal.
2. Principiu: Microscoapele optice tradiționale folosesc surse de lumină de câmp, iar imaginea fiecărui punct de pe specimen va fi afectată de difracție sau de lumina împrăștiată din punctele învecinate; Microscopul confocal cu scanare laser folosește un fascicul laser pentru a forma o sursă de lumină punctuală printr-un orificiu iluminat pentru a scana fiecare punct din planul focal al specimenului. Punctul iluminat de pe eșantion este fotografiat la orificiul de detectare și este primit punct cu punct sau linie de un tub fotomultiplicator (PMT) sau un dispozitiv de cuplare termoelectric (cCCD) după orificiul de detectare, formând rapid o imagine fluorescentă pe monitorul computerului ecran. Orificiul de iluminare și orificiul de detectare sunt conjugate în raport cu planul focal al lentilei obiectiv. Punctele de pe planul focal sunt focalizate simultan pe orificiul de iluminare și pe orificiul de emisie, iar punctele din afara planului focal nu vor fi fotografiate la orificiul de detectare. Aceasta are ca rezultat o imagine confocală care reprezintă secțiunea transversală optică a specimenului, depășind dezavantajul imaginilor neclare în microscopia convențională.
3. Domenii de aplicare: care implică medicină, cercetare pe animale și plante, biochimie, bacteriologie, biologie celulară, țesuturi și embrioni, știința alimentelor, genetică, farmacologie, fiziologie, optică, patologie, botanică, neuroștiință, biologie marine, știința materialelor, știința electronică, mecanică, geologie petrolieră și mineralogie.
