Utilizarea microscopului cu fluorescență stereo și precauții
Instrucțiuni:
(1) Așezați foaia de material pe scenă.
(2) Porniți stabilizatorul de tensiune al microscopului fluorescent. Apoi apăsați pe grupul de pornire pentru a aprinde lampa UV și nu o stingeți în 15 minute și nu o porniți din nou în 3 minute după ce este stinsă.
(3) Rotiți filtrul de excitație la v, filtrul de separare a culorilor la v și selectați un filtru de blocare de 495 sau 475 nm.
(4) Alegeți microscopul cu obiectiv fluorescent uvFL40, uvFL100 pentru examinarea microscopică.
(5) Adăugați ulei nefluorescent pe lamă, utilizați mai întâi 40 x, apoi utilizați un microscop de focalizare de 100 x pentru a verifica. Apare fluorescența.
(7) Deoarece fluorescența substanțelor fluorescente slăbește treptat cu timpul când acestea sunt iradiate de lumina ultravioletă, câmpul vizual ar trebui schimbat frecvent în timpul examinării microscopice.
(8) Microscoapele cu mărire redusă uvFL10 sau uvFL20 pot fi, de asemenea, utilizate pentru inspectarea materialelor (nu se adaugă ulei fluorescent când se utilizează lentile de putere redusă).
Metoda de înregistrare a imaginii cu fluorescență:
Imaginea cu fluorescență văzută de microscopul cu fluorescență are atât caracteristici morfologice, cât și culoarea și luminozitatea fluorescenței. La evaluarea rezultatelor, cele două trebuie combinate pentru o judecată cuprinzătoare. Rezultatele sunt înregistrate pe baza indicatorilor subiectivi, adică a observației vizuale de către lucrători. Ca o observație calitativă generală, practic de încredere. Odată cu dezvoltarea tehnologiei și științei, indicatorii obiectivi sunt utilizați pentru a înregistra rezultatele judecății în diferite grade, cum ar fi spectrofotometrele celulare, analizoarele de imagine și alte instrumente. Cu toate acestea, rezultatele înregistrate de aceste instrumente trebuie să fie combinate și cu judecăți subiective.
Fotografia cu microscopul cu fluorescență este foarte necesară pentru înregistrarea imaginilor cu fluorescență. Deoarece fluorescența este ușor de estompat și slăbit, este necesar să se înregistreze rezultatele în timp real. Metoda este practic aceeași cu cea a fotomicrografiei obișnuite. Trebuie doar să utilizați film fotosensibil de mare viteză, cum ar fi ASA200 sau mai sus sau 24. mai sus. Deoarece lumina ultravioletă are un efect puternic asupra stingerii fluorescenței, cum ar fi markerii FITC, luminozitatea fluorescenței va scădea cu 50% atunci când este iradiată cu lumină ultravioletă timp de 30 de secunde. Prin urmare, dacă viteza de expunere este prea mică, imaginea fluorescentă nu poate fi realizată. Microscoapele cu fluorescență de cercetare generală au dispozitive de sistem de fotomicrografie semiautomate sau complet automate.
Precauții:
(1) Operați strict în conformitate cu cerințele instrucțiunilor din fabrică de microscop cu fluorescență și nu modificați programul după bunul plac.
(2) Inspecția trebuie efectuată într-o cameră întunecată. După ce intri în camera întunecată, conectează sursa de alimentare și aprinde lampa cu mercur de ultra-înaltă presiune timp de 5-15 minute. După ce lumina puternică de la sursa de lumină este stabilă, ochii sunt complet adaptați la camera întunecată și apoi încep să observe specimenul.
(3) Pentru a preveni deteriorarea ochilor razelor ultraviolete, la reglarea sursei de lumină trebuie să purtați ochelari de protecție.
(4) Timpul de inspecție este de preferință de 1-2 ore de fiecare dată. Dacă depășește 90 de minute, intensitatea luminoasă a lămpii cu mercur de ultraînaltă presiune va scădea treptat și fluorescența se va slăbi; după ce specimenul este iradiat cu raze ultraviolete timp de 3-5 minute, fluorescența va fi de asemenea slăbită semnificativ; prin urmare, nu ar trebui să depășească cel mult 2-2 ore. 3h.
(5) Durata de viață a sursei de lumină a microscopului cu fluorescență este limitată, iar specimenele trebuie inspectate colectiv pentru a economisi timp și pentru a proteja sursa de lumină. Când vremea este caldă, trebuie adăugate ventilatoare pentru a disipa căldura, iar becurile noi trebuie înregistrate de la începutul timpului de utilizare. Când doriți să o utilizați din nou după ce lampa este stinsă, trebuie să așteptați până când becul este suficient de răcit înainte de a-l aprinde. Evitați să aprindeți sursa de lumină de mai multe ori pe zi.
(6) Observați specimenul imediat după colorare, deoarece fluorescența se va slăbi treptat în timp. Dacă specimenul este depozitat într-o pungă de plastic din polietilenă la 4 grade, timpul de slăbire a fluorescenței poate fi întârziat și evaporarea agentului de montare poate fi împiedicată.
(7) Standardul de judecată al luminozității fluorescenței: este, în general, împărțit în patru niveluri, adică „unul” - nu se poate vedea fluorescență sau o fluorescență slabă. „plus”—Se poate vedea doar fluorescența clar vizibilă. „plus plus”—Vizibil și luminos
