Cerințe pentru producția de specimene de microscop fluorescent
（1） Lamă de sticlă
Grosimea diapozitivei trebuie să fie între 0,8 și 1,2 mm. Dacă diapozitivul este prea gros, pe de o parte, absoarbe mai multă lumină și, pe de altă parte, nu poate determina adunarea luminii de excitație pe specimen. Lama trebuie să fie netedă, uniformă ca grosime și lipsită de fluorescență spontană evidentă. Uneori sunt necesare lame de sticlă de cuarț.
（2） Sticlă de acoperire
Grosimea geamului de acoperire este de aproximativ 0,17 mm, care este netedă și curată. Pentru a spori excitația, se poate folosi și sticlă de acoperire pentru interferență. Acesta este o sticlă de acoperire special concepută, cu mai multe straturi de substanțe (cum ar fi fluorură de magneziu) care au efecte de interferență diferite pe lungimi de undă diferite ale luminii. Poate permite fluorescenței să treacă fără probleme, în timp ce excitația prin reflexie poate excita specimenul.
（3） Specimen
Feliile de țesut sau alte specimene nu trebuie să fie prea groase, deoarece lumina de excitație este consumată în cea mai mare parte în partea inferioară a specimenului, în timp ce partea superioară observată direct de lentila obiectiv nu este pe deplin excitată. În plus, suprapunerea celulelor sau mascarea impurităților pot afecta judecata.
(4) Agent de etanșare
Glicerina este folosită în mod obișnuit ca agent de montare și trebuie să fie lipsită de fluorescență spontană, incoloră și transparentă. Luminozitatea fluorescenței este mai strălucitoare la pH 8,5 ~ 9,5 și nu este ușor să se estompeze rapid. Prin urmare, un amestec egal de glicerol și 0.5mol/l tampon carbonat la pH 9.0-9.5 este utilizat în mod obișnuit ca agent de etanșare.
（5） Ulei pentru oglindă
Când se observă specimene folosind un microscop cu fluorescență în câmp întunecat și un microscop cu ulei, este necesar să se folosească ulei pentru lentile. Cel mai bine este să utilizați un ulei special pentru lentile non-fluorescent, care poate fi înlocuit și cu glicerol, așa cum sa menționat mai sus. Se poate folosi și parafina lichidă, dar indicele de refracție este scăzut și are un impact ușor asupra calității imaginii.
Precauții pentru utilizarea unui microscop cu fluorescență
(1) Urmați cu strictețe cerințele manuale din fabrică ale microscopului cu fluorescență și nu modificați programul în mod arbitrar.
(2) Inspecția trebuie efectuată într-o cameră întunecată. După ce ați intrat în camera întunecată, conectați sursa de alimentare și aprindeți lampa cu mercur de ultra-înaltă presiune timp de 5 până la 15 minute. După ce sursa de lumină emite lumină puternică și se stabilizează, ochii se adaptează complet la camera întunecată înainte de a începe să observe specimenul.
(3) Pentru a preveni deteriorarea ochilor UV, ar trebui să purtați ochelari de protecție atunci când reglați sursa de lumină.
(4) Timpul de inspecție ar trebui să fie de 1-2 ore de fiecare dată. Dacă depășește 90 de minute, intensitatea luminoasă a lămpii cu mercur de ultraînaltă presiune scade treptat și fluorescența slăbește; După ce a fost expus la radiații ultraviolete timp de 3-5 minute, și fluorescența specimenului a scăzut semnificativ; Deci, nu ar trebui să depășească cel mult 2-3 ore.
(5) Durata de viață a sursei de lumină fluorescentă a microscopului este limitată, iar specimenul trebuie inspectat central pentru a economisi timp și pentru a proteja sursa de lumină. Când vremea este caldă, trebuie adăugat un ventilator electric pentru a disipa căldura și a se răci. Când înlocuiți un bec nou, timpul de utilizare trebuie înregistrat de la început. Când lampa este stinsă și dorește să fie folosită din nou, trebuie să aștepte ca becul să se răcească complet înainte de a fi aprins. Evitați aprinderea sursei de lumină de mai multe ori.
(6) Observați specimenul imediat după colorare, deoarece fluorescența scade treptat în timp. Dacă specimenul este depozitat într-o pungă de plastic din polietilenă la 4 grade, poate întârzia timpul de atenuare a fluorescenței și poate preveni evaporarea agentului de montare.
(7) Standardul de judecată pentru luminozitatea fluorescenței este în general împărțit în patru niveluri, și anume „unul” - lipsă sau fluorescență slabă vizibilă. plus - Se vede doar fluorescența clar vizibilă. plus plus - Vizibil cu fluorescență strălucitoare. „plus plus plus” – Fluorescență vizibilă și orbitoare.
