Cerințe pentru pregătirea probelor de rutină pentru microscopie
Microscopul confocal este un produs nou de înaltă tehnologie de epocă dezvoltat în anii 1980 și este unul dintre instrumentele analitice importante din biologia moleculară și știința vieții de astăzi. Microscopia confocală se bazează pe imagistica cu microscop cu fluorescență cu un dispozitiv de scanare laser adăugat, folosind un computer pentru procesarea imaginilor pentru a obține imagini fluorescente ale microstructurii din interiorul celulelor sau țesuturilor și pentru a observa modificările morfologiei multor aparate de semnal fiziologic la nivel subcelular. Deveniți un instrument puternic de cercetare în domeniile morfologiei, biologiei celulare moleculare, neuroștiințe, farmacologie, genetică și alte domenii științifice.
Pregătirea probei pentru microscopia confocală este un pas critic înainte de detectare. Probele trebuie marcate cu sonde fluorescente (single, duble, triple).
cel
Specimenele pot fi țesuturi fixe sau vii sau culturi aderente fixe sau vii. Celulele trebuie cultivate pe vase de cultură mici sau pe lame speciale Confocal. Suspendați celulele, agitați sau aruncați felii și acoperiți cu folie de acoperire. Grosimea Zda a probei este de aproximativ 1 ~ 2 mm, grosimea sticlei de acoperire utilizată ar trebui să fie mai mică de 0,17 mm, iar grosimea sticlei glisante ar trebui să fie între 0},8 ~ 1,2 mm, iar suprafața este netedă, grosimea este uniformă și nu există fluorescență de interferență evidentă. Mediul de montare este adesea folosit pentru probe fixe, iar glicerolul preparat în PBS cu un pH de 8.5-9 este folosit în mod obișnuit pentru montare.
Cerințe de rutină pentru pregătirea probelor:
1. Selectarea coloranților
Deoarece microscopul confocal folosește un laser cu o singură lungime de undă ca sursă de lumină, alegerea coloranților fluorescenți ar trebui să se bazeze pe lungimea de undă a laserului echipat cu microscopul confocal. Dacă există mai mulți coloranți fluorescenți în aceeași probă, lungimea de undă de emisie a acestora ar trebui, de asemenea, luată în considerare cât mai mult posibil. Nu vă suprapuneți pentru a evita problemele încrucișate.
2. Selectarea suportului de probă
În general, obiectivul de mare putere al microscopului confocal este o lentilă de ulei, deschiderea sa numerică este mică și distanța de lucru dintre lentilă și probă trebuie să nu fie mai mare de 0.17 mm. Toboganele și lamelele sunt în regulă. Dacă este vorba de celule sau particule suspendate, o placă Petri dedicată unui microscop confocal poate fi folosită pentru a transporta proba pentru observare.
3. Alegerea mediului de montare
Dacă proba trebuie observată o singură dată și fluorescența nu este ușor de stins, puteți alege o anumită concentrație de amestec de glicerol pentru a sigila lama. Dacă proba trebuie plasată pentru o perioadă de timp și luată de mai multe ori, trebuie selectat un mediu de montare anti-fluorescență pentru a reduce pierderea semnalelor fluorescente.
