Principii și caracteristici structurale ale microscopiei cu fluorescență
Microscopul cu fluorescență este utilizarea unei eficiențe luminoase ridicate a sursei de lumină punctuală, prin sistemul de filtrare a culorilor pentru a emite o anumită lungime de undă a luminii (cum ar fi ultraviolete 3650 sau violet-albastru 4200) ca lumina de excitare, excitarea materialului fluorescent din specimenul emite o varietate de culori diferite de fluorescență și apoi este mărit prin obiectiv și oculare pentru observare. În acest fel, în fondul de contrast puternic, chiar dacă fluorescența este foarte slabă, este ușor de identificat, sensibilitate ridicată, utilizată în principal pentru studiul structurii și funcției celulare și al compoziției chimice. Structura de bază a unui microscop cu fluorescență este compusă dintr-un microscop optic obișnuit plus unele accesorii (cum ar fi o sursă de lumină fluorescentă, filtre de excitație, separator de fascicul bicolor și filtre de blocare etc.). Sursă de lumină fluorescentă - lampă cu mercur de ultraînaltă presiune (50-200W), utilizată în general, care poate emite o varietate de lungimi de undă de lumină, dar fiecare material fluorescent are o lungime de undă de excitație fluorescentă cea mai puternică, deci este nevoie să adăugați filtre de excitație (în general filtru de excitare ultraviolet, violet, albastru și verde), astfel încât doar o anumită lungime de undă a luminii de excitare prin iradierea specimenelor, în timp ce cealaltă lumină este absorbită. Așadar, este necesar să adăugați un filtru de excitație (de obicei filtre de excitație ultraviolete, violete, albastre și verzi), astfel încât doar o anumită lungime de undă a luminii de excitație prin specimen, în timp ce altă lumină este absorbită. Când fiecare substanță este iradiată cu lumină de excitație, emite fluorescență vizibilă cu o lungime de undă mai mare decât cea a luminii iradiate într-un timp foarte scurt. Fluorescența are o specificitate, în general mai slabă decât lumina de excitație, pentru a putea observa fluorescența specifică, în obiectivul din spatele necesității de a adăuga un filtru de blocare (sau suprimare).
Rolul său este dublu:
Una este de a absorbi și de a bloca lumina de excitare în ocular, pentru a nu perturba fluorescența și deteriorarea ochilor.
Al doilea este să selectați și să lăsați fluorescența specifică să treacă, arătând o culoare fluorescentă specifică. Cele două tipuri de filtre trebuie selectate și utilizate împreună.
