Pregătirea și observarea probelor biologice pentru microscopie electronică
Rezoluția microscopului depinde de lungimea de undă a luminii utilizate, microscopul electronic a început să apară în 1933 se datorează utilizării unei lungimi de undă mult mai scurte decât lumina vizibilă a fasciculului de electroni ca sursă de lumină, astfel încât rezoluția acesteia poate realiza decât microscopul optic mult îmbunătățit. Sursa de lumină diferită determină și o serie de diferențe între microscopul electronic și microscopul optic.
În conformitate cu diferențele dintre principiul imagistic al fasciculului de electroni și rolul probei pe diferite moduri, microscopul electronic modern a fost dezvoltat pentru a forma un număr de tipuri, în prezent * utilizat în mod obișnuit este microscopul electronic de transmisie și electronii de scanare. microscop, primul poate fi în intervalul de 1,000-1,000,000 ori mărirea totală a intervalului de modificări, cea din urmă poate fi în mărirea totală a {{ {4}},000 ori mărirea totală a modificărilor între. Acest experiment se concentrează pe pregătirea probelor pentru cele două tipuri de microscoape, microscopul electronic cu transmisie și microscopul electronic cu scanare.
Materiale
1. Tulpina Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) oblică.
2. Soluții sau reactivi Acetat de amil, acid sulfuric concentrat, etanol anhidru, apă sterilă, acid fosfotungstic de sodiu 2% (pH 6.5-8.0) soluție apoasă, 0,3% soluție de polivinil formaldehidă (dizolvată în triclormetan), citocrom c, acetat de amoniu, plasmida pBR322.
3. Instrumente sau alte accesorii Microscop optic obișnuit, plasă de cupru, pâlnie de porțelan, pahar, vas plat, biuretă sterilă, pensetă sterilă, lancetă, diapozitive, ** placă de numărare, strat de vid, uscător de punct critic și așa mai departe.
Etapele operației
(I) Pregătirea probelor și observarea microscopiei electronice de transmisie
1. Tratarea plaselor metalice
Probele pentru microscopie optică sunt plasate pe lame pentru observare. Cu toate acestea, în microscopia electronică cu transmisie, deoarece electronii nu pot pătrunde în foaia de sticlă, numai materialul de plasă poate fi folosit ca purtător, numit de obicei plasă purtătoare. Plasa purtătoare poate fi împărțită în multe specificații diferite datorită materialelor și formelor diferite, dintre care * folosit în mod obișnuit este plasa de cupru 200-400 (număr de găuri). Plasa de cupru trebuie tratată înainte de utilizare pentru a îndepărta murdăria de pe ea și a o menține curată, altfel va afecta calitatea filmului de susținere și claritatea fotografiilor specimenului. Plasa de cupru folosită în acest experiment este de 400 de ochiuri, care poate fi tratată în felul următor: în primul rând, albiți-o cu acetat de amil timp de câteva ore, apoi clătiți-o cu apă distilată de mai multe ori, apoi înălbiți-o în etanol anhidru pt. deshidratare. Dacă plasa de cupru prin metoda de mai sus nu este încă curată, poate fi folosită pentru a dilua acidul sulfuric concentrat (1:1) scufundat în 1 ~ 2 minute, sau în soluție de NaOH 1% fiartă timp de câteva minute, clătită de mai multe ori cu apă distilată , plasat în deshidratare cu etanol anhidru, pentru a fi utilizat.
2. Pregatirea foliei suport
În observarea eșantionului, în rețeaua purtătoare ar trebui să fie, de asemenea, acoperită cu un strat de peliculă nestructurată, uniformă, altfel mostrele mici se vor scurge din găurile din rețeaua purtătoare, acest strat de film fiind de obicei numit film suport sau film purtător. Filmul suport ar trebui să fie transparent pentru electroni, iar grosimea sa ar trebui să fie în general mai mică de 20 nm; sub impactul fasciculului de electroni, filmul ar trebui să aibă, de asemenea, un anumit grad de rezistență mecanică, poate menține stabilitatea structurii și are o conductivitate termică bună; în plus, rețeaua de suport nu ar trebui să aibă o structură vizibilă la microscopul electronic și nu are o reacție chimică cu proba transportată și nu interferează cu observarea probei, iar grosimea acesteia este în general de aproximativ 15 nm. Folia suport poate fi realizată din folie de plastic (de ex. folie de bumbac de foc, folie de polietilenă formaldehidă etc.), folie de carbon sau folie metalică (de ex. folie de beriliu etc.). În condiții de rutină de lucru, cerințele pot fi îndeplinite cu o folie de plastic, în timp ce pregătirea foliei de plastic în filmul adeziv de bumbac de foc este relativ ușoară, dar rezistența nu este la fel de puternică ca filmul de polietilenă formaldehidă.
