Pregătirea și observarea probelor biologice pentru microscoape electronice
Rezoluția unui microscop depinde de lungimea de undă a luminii utilizate. Microscopul electronic, care a apărut în 1933, a atins o rezoluție semnificativ mai mare decât un microscop optic datorită utilizării ca surse de lumină a fasciculelor de electroni cu lungimi de undă mult mai scurte decât lumina vizibilă. Sursele de lumină diferite determină și o serie de diferențe între microscoapele electronice și microscoapele optice.
Pe baza diferențelor dintre principiile imaginii cu fascicul de electroni și a modului în care acţionează asupra probelor, microscoapele electronice moderne s-au dezvoltat în multe tipuri. În prezent, cele mai frecvent utilizate sunt microscoapele electronice cu transmisie și microscoapele electronice cu scanare. Primul are o mărire totală care poate varia între 1000-10000000 de ori, în timp ce al doilea are o mărire totală care poate varia între 20-300000 de ori. Acest experiment introduce în principal pregătirea a două tipuri de probe de microscop, microscopia electronică cu transmisie și microscopia electronică cu scanare.
2, Echipamente
1. Tulpina Escherichia coli este înclinată.
2. Soluție sau reactiv: acetat de pentil, acid sulfuric concentrat, etanol anhidru, apă sterilă, 2% fosfotungstat de sodiu (pH 6,5-8,0) soluție apoasă, 0,3% polivinil formaldehidă (dizolvată în cloroform), soluție de citocrom c, amoniu pBR322.
3. Instrumentele sau alte instrumente includ microscoape optice obișnuite, plase de cupru, pâlnii de porțelan, pahare, vase Petri, picături sterile, pensete sterile, ace, lame de sticlă, plăci de numărare, mașini de acoperire în vid, uscători de puncte critice etc.
3, pași de operare
(1) Pregătirea și observarea probelor pentru microscopia electronică cu transmisie
1. Tratarea plaselor metalice
Proba unui microscop optic este plasată pe o lamă de sticlă pentru observare. Cu toate acestea, într-o oglindă de transmisie, deoarece electronii nu pot pătrunde în foaia de sticlă, un material plasă poate fi folosit doar ca purtător, denumit în mod obișnuit plasă purtătoare. Plasa de transport poate fi împărțită în diferite specificații datorită diferitelor materiale și forme, printre care se utilizează în mod obișnuit plasa de cupru cu 200-400 ochiuri (număr de găuri). Plasa de cupru trebuie tratată înainte de utilizare pentru a îndepărta orice murdărie și a o menține curată, altfel va afecta calitatea filmului de susținere și claritatea fotografiilor specimen. Plasa de cupru de 400 de mesh utilizată în acest experiment poate fi tratată prin următoarea metodă: mai întâi, înmuiați și plutiți cu acetat de pentil timp de câteva ore, apoi clătiți de mai multe ori cu apă distilată și, în final, scufundați și plutiți plasa de cupru în etanol anhidru pentru deshidratare. Dacă plasa de cupru încă nu este curată după metodele de mai sus, aceasta poate fi înmuiată în acid sulfuric concentrat diluat (1:1) timp de 1-2 minute sau fiartă în soluție de NaOH 1% timp de câteva minute, clătită de mai multe ori cu apă distilată și apoi deshidratată în etanol anhidru pentru utilizare ulterioară.
