Note și sfaturi despre utilizarea mai multor microscoape cu contrast de fază
1) Instalați dispozitivul de contrast de fază: îndepărtați lentila de condensare a microscopului obișnuit și instalați lentila de condensator cu o diafragmă inelară pe un microscop potrivit; îndepărtați lentila obiectiv obișnuită a microscopului și înlocuiți-o cu o lentilă obiectiv cu o placă de fază; înlocuiți ocularul cu oculare de focalizare pentru microscoape cu contrast de fază; filtre speciale verzi (uneori nu sunt necesare) sunt plasate la intrarea de lumină a sursei de lumină.
2) Alinierea luminii și focalizarea: Reglați ocularul de focalizare și șurubul de reglare a grosimii până când un cerc alb și un cerc negru pot fi văzute clar în câmpul vizual. Cercul negru este fix, iar cercul alb poate fi mutat prin reglarea șurubului de pe dispozitivul condensatorului, astfel încât cercul negru și cercul alb să coincidă complet. Scoateți ocularul de focalizare și înlocuiți-l cu ocularul original al microscopului pentru a verifica.
Analiza problemelor în utilizarea microscopului cu contrast de fază
1. Influența grosimii probei Când se efectuează observarea contrastului de fază, grosimea probei trebuie să fie de 5 μm sau mai subțire. Când utilizați o probă mai groasă, stratul superior al eșantionului este foarte clar, dar stratul profund va fi neclar și va cauza interferențe de defazare. și împrăștierea luminii.
2. Influența sticlei de acoperire și a sticlei de lame Eșantionul trebuie acoperit cu un geam de acoperire, altfel inelul luminos al diafragmei inelare și inelul întunecat al plăcii de fază sunt dificil de suprapus. Observarea contrastului de fază are, de asemenea, cerințe înalte cu privire la calitatea sticlei de sticlă și a sticlei de acoperire. Când există zgârieturi, grosime neuniformă sau neuniformitate, vor apărea distorsiuni inelului luminos și interferențe de fază. În plus, atunci când glisa este prea groasă sau prea subțire, inelul luminos al diafragmei inelare va deveni mai mare sau mai mic.
3. Efect de halo și decolorare În procesul de imagistică al microscopului cu contrast de fază, atunci când o structură devine întunecată din cauza întârzierii de fază, nu este pierderea luminii, ci rezultatul redistribuirii luminii pe planul imaginii. Deci, lumina care se pierde aparent în zonele întunecate va apărea ca un halou strălucitor în jurul obiectelor mai întunecate. Acesta este un dezavantaj al microscopiei cu contrast de fază, care împiedică observarea structurilor fine, iar fenomenul de halo este mai grav atunci când diafragma inelară este foarte îngustă. Un alt fenomen în microscopia cu contrast de fază este efectul de umbrire, care se referă la pierderea contrastului la marginile unei zone mai mari cu aceeași întârziere de fază atunci când este observată prin contrast de fază.
4. Inversarea de fază Când n'n, contrastul luminos și întunecat al imaginii este chiar opus, ceea ce se numește inversiune de fază. Este de nerecunoscut când diferența de fază δ=0, iar contrastul devine mai mare odată cu creșterea lui δ, iar inversarea de fază va apărea când δ continuă să crească până la o anumită valoare. Când se folosește o lentilă obiectiv cu o valoare mare de absorbție de 90 procente (contrast ridicat), această valoare de transformare este de aproximativ 0,55λ, iar când se folosește o lentilă obiectiv cu valoare standard de absorbție de 70%, aceasta este de aproximativ 0,33λ . Obiectivele cu valori de absorbanță mai mari ar trebui utilizate pentru a rezolva diferențe mai mici de cale optică.
