Numărarea directă la microscop microbiologic
Principiul experimental
Numărarea directă la microscop folosind un hemocitometru este o metodă de numărare microbiană utilizată în mod obișnuit. Avantajul acestei metode este că este intuitivă și rapidă. Puneți suspensia bacteriană (sau suspensia de spori) diluată corespunzător în camera de numărare între lamă și capacul de sticlă al hemocitometrului și numărați la microscop. Deoarece volumul camerei de numărare este fix (0.1mm2), acesta poate fi convertit în numărul total de microorganisme pe unitatea de volum în funcție de numărul de microorganisme observate la microscop. Deoarece această metodă numără suma bacteriilor vii și moarte, este numită și metoda numărării totale a bacteriilor.
Un hemocitometru este de obicei o lamă specială de sticlă pe care patru caneluri formează trei platforme. Platforma din mijloc este împărțită în două jumătăți printr-o canelură orizontală scurtă. Pe platformă este gravată o grilă pe fiecare parte. Fiecare grilă este împărțită în nouă pătrate mari. Pătratul mare din mijloc este sala de numărare. Microorganismele sunt numărate în camera de numărare.
Scara camerei de numărare are în general două specificații, una este că un pătrat mare este împărțit în 16 pătrate din mijloc, iar fiecare pătrat din mijloc este împărțit în 25 de pătrate mici (Figura Ⅷ-2); celălalt este un pătrat mare. Pătratul este împărțit în 25 de pătrate din mijloc, iar fiecare pătrat din mijloc este împărțit în 16 pătrate mici (Figura Ⅷ-1, C). Dar indiferent de ce fel de tablă de numărare, numărul de pătrate mici din fiecare pătrat mare este același, adică 16×25=400 pătrate mici.
Lungimea laterală a fiecărui pătrat mare este de 1 mm, iar aria fiecărui pătrat mare este de 1 mm2. După ce capacul de sticlă este acoperit, înălțimea dintre geamul glisant și capacul este de 0,1 mm, deci volumul camerei de numărare este de 0,1mm3.
Când numărați, de obicei numărați numărul total de bacterii din cele cinci pătrate din mijloc, apoi obțineți valoarea medie a fiecărui pătrat din mijloc și apoi înmulțiți cu 16 sau 25 pentru a obține numărul total de bacterii dintr-un pătrat mare, apoi convertiți în numărul total de bacterii în 1 ml soluție bacteriană.
Echipament de laborator
Hemocitometru, microscop, lamelă, capilar steril;
Materiale experimentale
Suspensie de Saccharomyces cerevisiae
Procedura experimentală (metoda de numărare directă cu microscopul microbian)
1. diluare
Se diluează corect suspensia de Saccharomyces cerevisiae. Dacă soluția bacteriană nu este groasă, nu trebuie diluată.
2. Sala de numărare microscopică
Înainte de a adăuga probe, efectuați o inspecție microscopică a camerei de numărare a plăcii de numărare. Dacă există murdărie, aceasta trebuie curățată înainte de numărare.
3. adăugați probă
Acoperiți placa de hemocitometru curată și uscată cu un pahar de acoperire, apoi utilizați un picurător steril cu gura îngustă pentru a arunca o picătură mică de soluție diluată de Saccharomyces cerevisiae de pe marginea geamului de acoperire (nu prea mult), astfel încât soluția de bacterii este aproape de golul de-a lungul golului. Osmoza capilară intră de la sine în camera de numărare, iar camera generală de numărare poate fi umplută cu lichid bacterian. Aveți grijă să nu aveți bule de aer.
4. numărarea microscopului
După odihnă timp de 5 minute, așezați hemocitometrul pe scena microscopului, utilizați mai întâi o lentilă de putere mică pentru a găsi locația camerei de numărare și apoi treceți la o lentilă de mare putere pentru numărare. Dacă se constată că soluția bacteriană este prea groasă sau prea subțire înainte de numărare, este necesară reajustarea diluției înainte de numărare. Diluarea generală a probei necesită aproximativ
5-10 celule sunt potrivite. Fiecare cameră de numărare selectează bacteriile în 5 grile de mijloc (opțional 4 colțuri și grile centrale) pentru numărare. Bacteriile de pe linia grilei sunt, în general, numărate doar pe liniile superioare și din dreapta. În cazul înmuguririi drojdiei, când dimensiunea corpului mugurelui atinge jumătate din celula mamă, numărați două bacterii. Numărați o probă pentru a calcula conținutul bacterian al probei din valorile numărate în cele două camere de numărare.
5. Curățarea hemocitometrului
După utilizare, clătiți placa de numărare a celulelor sanguine de pe robinet cu jeturi de apă, nu o spălați cu obiecte dure și uscați-o singur sau cu un uscător de păr după spălare. Examinarea microscopică, observați dacă există bacterii reziduale sau alte sedimente în fiecare celulă. Dacă nu este curat, trebuie spălat în mod repetat până când este curat.
