Metode de preparare a probelor pentru microscopia optică și electronică a filmelor
Metoda de microfilmare include în general patru categorii: metoda de secționare, metoda de etanșare globală, metoda de acoperire și metoda de presare.
①Metoda feliei. Grosimea feliei de microscop optic între 2 și 25 de microni, materiale vegetale și animale generale, felia este de aproximativ 10 microni grosime este adecvată. Metoda de secționare variază în funcție de diferiții agenți de înglobare. Utilizate în mod obișnuit sunt metoda de secționare cu parafină, metoda de secționare cu lipici de bumbac, metoda de secționare înghețată și metoda metacrilatului de glicol (denumită metoda GMA). Metoda de secţionare cu parafină include etapele de fixare, încorporare, secţionare, colorare, deshidratare şi etanşare. Cheia este să încorporați biomaterialul în ceară de parafină și să utilizați ceară de parafină ca suport pentru a tăia biomaterialul scufundat în blocul de ceară în felii subțiri ideale. Procesul de operare este următorul: fixare → spălare cu apă → pas cu pas de la concentrație scăzută la concentrație mare deshidratare alcool → transparența xilenului → imersie în ceară → înglobare → secționare → petice → deparafinare cu xilen → pas cu pas de la concentrație mare la concentrație scăzută tratarea cu alcool și, în final, trecerea la apă → colorare → pas cu pas de la deshidratarea alcoolului cu concentrație scăzută la mare → transparență cu xilen → etanșare cu adeziv rășină. Pașii de bază implicați sunt aceiași în toate tipurile de tehnici de realizare a filmului.
② Metoda de etanșare integrală. Folosit pentru celule unice, organisme minuscule sau organe dispersate ale metodei întregului film montat. Această metodă necesită, de asemenea, diverse etape de fixare, colorare, deshidratare, transparență și etanșare. Această metodă este utilizată pentru prepararea pieselor bucale ale aripioarelor și insectelor.
Metoda frotiului. O metodă de preparare în care un specimen biologic ușor de dispersat este acoperit pe o lamă. Frotiul de sânge este un exemplu.
④Metoda de apăsare. Țesuturile naturale, ușor de dispersat sau țesuturile ușor de dispersat după tratament, cum ar fi spermatocitele animale, celulele vârfului rădăcinii, etc. pe lamă, plus o lamă, apoi zdrobesc cu forță țesuturile, astfel încât celulele sau structurile intracelulare să se răspândească într-un strat a metodelor de filmare. Metoda presei este adesea folosită pentru observarea cromozomilor, de obicei colorați cu acetat magenta, roșu lichen și roșu acid carbolic.
