Măsurarea volumului blocului de țesut folosind microscoape biologice
Până acum, criofixarea, secționarea ultra-subțire înghețată și uscarea prin înghețare-să fie metode de rutină pentru microscopia cu raze X a țesuturilor și celulelor-. Vă rugăm să furnizați următoarele detalii despre această metodă:
Un microscop biologic cu un reflector poate muta reflectorul în sus și în jos pentru a obține o luminozitate moderată, iar deschiderea diafragmei variabile poate fi, de asemenea, modificată pentru a obține o luminozitate moderată. Dacă lumina este de la soare, reflectorul poate fi ridicat în mod corespunzător, iar deschiderea luminii variabile poate fi mărită corespunzător. Dacă lumina este prea puternică, reflectorul poate fi coborât corespunzător, iar deschiderea intersecției poate fi redusă corespunzător. Dacă tot te simți orbitor în această situație, poți alege să plasezi un filtru adecvat pe suportul de sub reflector. Acest stejar poate atinge o strălucire care te mulțumește. Desigur, ajustarea pozițiilor superioare și inferioare ale reflectorului poate modifica dimensiunea diafragmei citirii luminii și poate selecta filtre adecvate, ceea ce necesită o anumită perioadă de practică și experiență.
O problemă foarte importantă în microscopia biologică este procesul de prelevare a probelor și izolarea celulelor. După uscare prin congelare-și încorporarea rășinii (FD), secțiunile ultra-subțiri congelate trebuie prelucrate cu atenție pentru a se asigura că conținutul de 65 de elemente al fiecărei piese nu este deteriorat în timpul observării și analizei. Datorită numeroșilor pași și a costului ridicat implicat în microanaliza cu raze X-, este regretabil să se tragă concluzii incorecte dacă celulele analizate sunt deteriorate sau moarte după o procesare prelungită și în mai multe-etape. Celulele miocardice separate prin tratamentul cu gelatinază au două forme, una are formă de tijă lungă-și cealaltă este circulară. Acesta din urmă se referă la celulele moarte care sunt deteriorate în timpul procesului de separare a celulelor.
Conținutul și distribuția electroliților în aceste două tipuri de celule sunt foarte diferite la microscop biologic. Na este foarte mare și K este extrem de scăzut în cardiomiocitele circulare, iar concentrația de Ca în dendritele liniare este foarte mare. După verificarea cu alte metode analitice, s-a dovedit că Na și K scăzut în celulele circulare și Ca în mitocondrii sunt rezultatul deteriorării membranei în timpul separării celulelor. Metoda de fixare la rece pentru celule și țesuturi implică adesea mai întâi stingerea și apoi depozitarea lor în azot lichid. Fixarea de stingere este crucială pentru efectul de conservare. Celulele vii sau țesuturile proaspete sunt bogate în apă, iar atunci când sunt stinse, părțile celulelor sau țesuturilor care intră în contact direct cu agentul frigorific (mai ales atunci când se folosește azot lichid pentru răcire) sunt adesea înghețate și fixate mai întâi, formând o „cochilie” care împiedică zdrobirea și fixarea părții centrale a celulelor. Prin urmare, atunci când se efectuează microanaliza cu raze X, se constată adesea că există cristale de gheață în partea centrală a celulelor mai mari. Pentru a preveni această situație, se folosește ca agent frigorific o substanță cu un punct de topire mai mare decât azotul lichid, dar mai mic cu 806c. Există multe dintre aceste substanțe, dar sunt ușor de obținut și cel mai accesibil este propanul concentrat (punct de fierbere 42,120c, punctul de topire 187,10c, greutate moleculară 44,1), care are și o viteză rapidă de răcire. Dar dezavantajul său este că este inflamabil.
