Introducere în avantajele îmbunătățite ale microscopiei multiphoton cu scanare laser
Microscopul multiphoton cu scanare laser este o îmbunătățire semnificativă a microscopiei optice, manifestată în principal în capacitatea de a observa structuri profunde ale celulelor vii, celulelor fixe și țesuturilor și să obțină structuri z-plane clare și ascuțite cu mai multe straturi, și anume felii optice, care pot fi utilizate pentru a construi structuri solide tridimensionale ale specimenelor. Microscopul confocal folosește o sursă de lumină laser, care este extinsă pentru a umple întregul plan focal al obiectivului obiectiv, apoi a convergent în puncte foarte mici pe planul focal al eșantionului prin sistemul de lentilă a obiectivului obiectiv. Conform deschiderii numerice a obiectivului obiectiv, diametrul punctului de iluminare strălucitor este de aproximativ 0. 25-0. 8 μ m, iar adâncimea este de aproximativ 0. 5-1. 5 μm. Mărimea punctului confocal este determinată de proiectarea microscopului, lungimea de undă laser, caracteristicile obiective, setările de stare ale unității de scanare și proprietățile specimenului. Intervalul de iluminare și adâncimea unui microscop de câmp sunt mari, în timp ce iluminarea unui microscop confocal este concentrată pe un punct focal pe planul focal. Avantajul de bază al microscopiei confocale este că poate efectua secționare optică fină pe exemplare fluorescente groase (până la 5 0 μ m sau mai mult), cu o grosime de aproximativ 0,5 până la 1,5 μm. Seria de imagini de felie optică poate fi obținută prin mutarea specimenului în sus și în jos folosind motorul pas cu pas cu axa Z a microscopului. Colecția de informații despre imagine este controlată în planul * *, fără interferențe din semnalele emise din alte poziții de pe eșantion. După ce a eliminat influența fluorescenței de fundal și a crescut raportul semnal-zgomot, contrastul și rezoluția imaginilor confocale sunt îmbunătățite semnificativ în comparație cu imaginile tradiționale de fluorescență de iluminare a câmpului. În multe exemplare, componentele structurale complexe se împletesc pentru a forma sisteme complexe, dar odată ce se pot colecta suficiente secțiuni optice, putem folosi software pentru a le reconstrui în trei dimensiuni. Această metodă experimentală a fost utilizată pe scară largă în cercetarea biologică pentru a elucida relațiile structurale și funcționale complexe între celule sau țesuturi.
