Introducere în microscopia cu scanare cu laser multifoton: avantaje și dezavantaje
1. Excitată de lumina roșie sau infraroșie, împrăștierea luminii este mică, iar împrăștierea particulelor mici este invers proporțională cu puterea a patra a lungimii de undă.
2. Mai mulți fotoni împrăștiați din secțiunea transversală a imaginii pot fi colectați fără a fi nevoie de găuri.
3. Găurile nu pot distinge fotonii împrăștiați emiși din zonele defocalizate sau focale, iar multifotonii au un raport semnal-zgomot mai bun în imaginile profunde.
4. Lumina ultravioletă sau vizibilă utilizată pentru excitarea unui singur foton este ușor absorbită și atenuată de probă înainte ca fasciculul să atingă planul focal, ceea ce face dificilă excitarea straturilor profunde.
5. În ceea ce privește observarea la microscopie biologică, primul considerent este de a nu deteriora starea activă a organismului în sine, de a menține circulația apei, concentrația ionilor, oxigenul și nutrienții. În domeniul observării luminii, atât energia termică, cât și cea fotonică trebuie să rămână în doza de iradiere și energia luminoasă care nu dăunează celulelor.
6. Microscopia multifotonica are multe avantaje. În ceea ce privește rezoluția tridimensională, invazia adâncimii, eficiența împrăștierii, lumina de fundal, raportul semnal-zgomot, controlul etc., există caracteristici pe care microscoapele laser anterioare nu le posedă sau nu le pot depăși
Dezavantajele microscopului cu scanare laser multifotoni:
1. Numai pentru imagistica cu fluorescență.
2. Dacă proba include cromofori care pot absorbi lumina de excitație, proba poate fi supusă deteriorării termice.
3. Rezoluția este ușor redusă, deși poate fi îmbunătățită prin utilizarea simultană a găurilor mici confocale, există pierderi de semnal.
4. Datorită limitărilor laserelor ultrarapide scumpe, costul microscoapelor cu scanare multifotoni este relativ mare.
