Cum să alegi între microscop inversat și microscop cu fluorescență?
Microscopul este un instrument important în cultura celulară și experimentele derivate aferente. În prezent, pe piață există diverse tipuri de microscoape, iar alegerea unui microscop care să răspundă nevoilor și să fie potrivit este o provocare. Mai jos, vom prezenta principiile microscoapelor inversate și ale microscoapelor cu fluorescență pentru ca toată lumea să aleagă.
Microscopul inversat, ca un microscop obișnuit, constă în principal din trei părți: partea mecanică, partea de iluminare și partea optică. Compoziția unui microscop inversat este aceeași cu cea a unui microscop vertical obișnuit, cu excepția faptului că lentila obiectivului și sistemul de iluminare sunt inversate, primul sub scenă și cel din urmă deasupra scenei. Această structură extinde în mod semnificativ distanța efectivă dintre sistemul de iluminat reflector și scenă, facilitând amplasarea instrumentelor de observare mai groase, cum ar fi vase de cultură și sticle de cultură celulară (desigur, se pot folosi și lamele de sticlă), în timp ce distanța de lucru dintre obiectiv și materialul nu trebuie să fie foarte mare. Microscopul inversat este utilizat de instituțiile medicale și de sănătate, universități și institute de cercetare pentru observarea microorganismelor, celulelor, bacteriilor, culturilor de țesuturi, suspensiilor, sedimentelor etc. Poate observa continuu procesul de proliferare și diviziune celulară și bacteriană în mediul de cultură și poate capta orice formă a acestui proces. Utilizat pe scară largă în domenii precum citologie, parazitologie, oncologie, imunologie, inginerie genetică, microbiologie industrială și botanică.
Microscopia cu fluorescență este utilizată pentru a studia absorbția, transportul, distribuția și localizarea substanțelor în interiorul celulelor. Pentru obiectul testat, există două moduri de a genera fluorescență: fluorescența spontană, care este emisă direct de iradierea ultravioletă; Fluorescența secundară apare atunci când obiectul observat este tratat cu coloranți fluorescenți și expus la lumină ultravioletă înainte de a emite fluorescență. Unele substanțe din celule, cum ar fi clorofila, produc fluorescență spontană după ce au fost expuse la radiații ultraviolete; Este posibil ca unele substanțe în sine să nu emită fluorescență, dar dacă sunt colorate cu coloranți fluorescenți sau anticorpi fluorescenți, pot emite și fluorescență secundară sub radiația ultravioletă. Un microscop cu fluorescență utilizează o sursă de lumină punctuală de înaltă eficiență luminoasă pentru a emite o anumită lungime de undă a luminii (UV 365nm sau UV albastru 420nm) printr-un sistem de filtrare a culorii ca lumină de excitație, care excită substanțele fluorescente din probă pentru a emite diferite culori de fluorescență. După aceea, se observă prin mărirea obiectivului și a ocularului. În acest fel, chiar și cu fluorescență slabă, este ușor de recunoscut și foarte sensibil pe fundaluri puternic contrastante. Este folosit în principal pentru studiul structurii, funcției și compoziției chimice celulare.
Microscopia cu fluorescență poate fi împărțită în două tipuri: tip transmisie și tip cădere. Primul este mai primitiv, în timp ce al doilea este mai avansat. Construcția de bază a celor două tipuri de microscoape cu fluorescență este similară, principala diferență fiind că lumina de excitație transmisă trece prin specimen, producând fluorescență în ansamblu. Fluorescența intră apoi în lentila obiectivului, iar cu cât mărirea este mai mare, cu atât fluorescența este mai slabă; Lumina de excitație care căde se proiectează pe suprafața specimenului, producând fluorescență care intră în lentila obiectivului. Cu cât mărirea este mai mare, cu atât fluorescența este mai puternică, făcându-l potrivit pentru observarea la putere mare. Principalele componente ale unui microscop cu fluorescență includ o sursă de lumină cu lampă cu mercur, o placă de filtru de excitație, un spectrofotometru (tip picătură), o placă de filtru de suprimare și un condensator de câmp întunecat (tip de transmisie). În plus, din cauza încălzirii severe a lămpilor cu mercur, cele mai multe dintre ele sunt echipate și cu filtre de absorbție a căldurii. Unele microscoape cu fluorescență au, de asemenea, un obiectiv de contrast de fază și o deschidere circulară, permițând observarea contrastului de fază. Unele microscoape cu fluorescență adoptă o structură inversată, care este și un microscop inversat și așa mai departe.
În plus, microscoapele menționate mai sus pot fi asamblate în microscoape digitale prin instalarea CCD, care convertește imaginile fizice văzute de microscop în imagini analogice digitale și le imaginează pe un computer. Drept urmare, ne putem muta cercetarea în domeniul micro de la observarea tradițională binoculară la reproducerea prin afișaje, îmbunătățind astfel eficiența muncii.
