Cum diferă microscopia cu fluorescență de microscopia confocală laser
Microscop cu fluorescență
1, microscopul cu fluorescență este de a utiliza lumina ultravioletă ca sursă de lumină, folosită pentru a iradia obiectul care urmează să fie examinat, astfel încât să emită fluorescență și apoi să observe forma obiectului și locația acestuia la microscop. Microscopul cu fluorescență este utilizat pentru a studia absorbția, transportul, distribuția și localizarea substanțelor chimice în celule. Unele substanțe din celulă, cum ar fi clorofila, pot avea fluorescență după iradierea cu lumina ultravioletă; există unele substanțe care nu pot fluoresce de la sine, dar dacă sunt colorate cu coloranți fluorescenți sau cu anticorpi fluorescenți, pot fluoresce și după iradierea cu lumină ultravioletă, iar microscopia cu fluorescență este unul dintre instrumentele de cercetare calitativă și cantitativă a acestui gen de substanțe.
2, principiul microscopului cu fluorescență:
(A) sursă de lumină: sursa de lumină radiază diferite lungimi de undă de lumină (în ultraviolet până la infraroșu).
(B) sursă de filtru de excitație: prin eșantion se poate produce fluorescență de o anumită lungime de undă a luminii, blocând în același timp excitarea luminii inutile de fluorescență.
(C) Probă fluorescentă: în general colorată cu un fluorocrom.
(D) Filtre de blocare: blochează lumina de excitație care nu este absorbită de eșantion pentru a transmite în mod selectiv fluorescența, iar unele lungimi de undă din fluorescență sunt, de asemenea, transmise selectiv. Un microscop care folosește lumina ultravioletă ca sursă de lumină pentru a face obiectul iradiat să fluoresce. Microscopul electronic a fost asamblat pentru prima dată în 1931 la Berlin, Germania, de către Knorr și Haroska. Acest microscop folosește un fascicul de electroni de mare viteză în loc de un fascicul de lumină. Deoarece lungimea de undă a fluxului de electroni este mult mai mică decât unda luminoasă, astfel încât mărirea microscopului electronic poate fi de până la 800,000 ori, rezoluția limitei minime de 0,2 nanometri . 1963 a început să folosească microscopul electronic de scanare poate fi văzut pe suprafața structurii minuscule a obiectului.
3, domeniul de aplicare: utilizat pentru a mări imaginea obiectelor minuscule. Utilizat în general în biologie, medicină, particule microscopice și alte observații.
Microscop confocal
1, microscop confocal în lumina reflectată pe drum plus o jumătate de lentilă semi-reflectorizantă, va fi trecut prin lentila luminii reflectate pliat în alte direcții, în focalizarea sa pe o deflectoare cu un orificiu, gaura este situată în focalizarea, în spatele deflectorului este un tub fotomultiplicator. Se poate imagina că lumina reflectată înainte și după punctul focal al luminii detectorului prin acest set de sistem confocal, nu se va putea focaliza pe gaura mică, va fi blocată de deflector. Deci fotometrul măsoară intensitatea luminii reflectate la punctul focal.
2, principiu: microscopul optic tradițional folosește o sursă de lumină de câmp, imaginea fiecărui punct de pe specimen va fi interferată de difracția sau împrăștierea luminii din punctele învecinate; Microscopul confocal cu scanare laser folosește un fascicul laser prin gaura de iluminare pentru a forma o sursă punctuală de lumină pe specimen în planul focal al scanării fiecărui punct de pe specimen, specimenul este iradiat, în detectarea orificiului de la imaginea , prin detectarea orificiului stenopeic după tubul fotomultiplicator (PMT) sau dispozitivul de electrocuplare la rece (cCCD) punct cu punct sau punct cu punct sau punct cu punct, intensitatea luminii se măsoară cu un fotometru. cCCD) primește punct cu punct sau linie cu linie și formează rapid o imagine fluorescentă pe ecranul monitorului computerului. Orificiul de iluminare și orificiul de detectare în raport cu planul focal al lentilei obiectiv sunt conjugate, punctul de pe planul focal concentrându-se în același timp pe orificiul de iluminare și orificiul de emisie, punctul din afara planului focal nu va fi în orificiul de detectare la imagistica, astfel încât imaginea confocală să fie specimenul secțiunii transversale optice, depășind neajunsurile imaginilor neclare ale microscoapelor obișnuite.
3, Domenii de aplicare: medicină, cercetare pe animale și plante, biochimie, bacteriologie, biologie celulară, embriologie tisulară, știință alimentară, genetică, farmacologie, fiziologie, optică, patologie, botanică, neuroștiință, biologie marine, știința materialelor, știință electronică, mecanică, geologie petrolieră, mineralogie.
