Cum diferă microscopia cu fluorescență de microscopia laser confocală
Microscop cu fluorescență
1. Un microscop cu fluorescență folosește lumina ultravioletă ca sursă de lumină pentru a ilumina obiectul inspectat pentru a-l face să emită fluorescență și apoi să observe forma și locația obiectului la microscop. Microscopia cu fluorescență este utilizată pentru a studia absorbția și transportul substanțelor în interiorul celulelor, precum și distribuția și poziționarea substanțelor chimice. Unele substanțe din celule, cum ar fi clorofila, pot avea fluorescență după ce au fost iradiate de razele ultraviolete; unele substanțe în sine nu pot fluoresce, dar dacă sunt colorate cu coloranți fluorescenți sau anticorpi fluorescenți, pot fluoresce după iradierea cu raze ultraviolete. Microscopia cu fluorescență este unul dintre instrumentele cercetării calitative și cantitative asupra unor astfel de substanțe.
2. Principiul microscopului cu fluorescență:
(A) Sursă de lumină: sursa de lumină radiază lumină de diferite lungimi de undă (de la ultraviolet la infraroșu).
(B) Sursa de lumină cu filtru de excitare: transmite lumină cu o anumită lungime de undă care poate determina fluorescența specimenului, blocând în același timp lumina care este inutilă pentru stimularea fluorescenței.
(C) Specimenele fluorescente: în general colorate cu pigmenți fluorescenți.
(D) Filtru de blocare: Blochează lumina de excitație care nu este absorbită de eșantion și transmite selectiv fluorescența. Unele lungimi de undă din fluorescență sunt de asemenea transmise selectiv. Un microscop care folosește lumina ultravioletă ca sursă de lumină pentru a provoca fluorescerea obiectului iluminat. Microscopul electronic a fost asamblat pentru prima dată în 1931 la Berlin, Germania, de Knorr și Hallowska. Acest microscop folosește un fascicul de electroni de mare viteză în loc de un fascicul de lumină. Deoarece lungimea de undă a fluxului de electroni este mult mai mică decât cea a luminii, mărirea microscopului electronic poate ajunge de 800,000 ori, iar limita minimă de rezoluție este de 0,2 nanometri. Microscopul electronic cu scanare, care a început să fie folosit în 1963, permite oamenilor să vadă structurile minuscule de pe suprafața obiectelor.
3. Domeniul de aplicare: Folosit pentru a mări imaginile obiectelor mici. Utilizat în general în observarea biologiei, medicinei, particulelor microscopice etc.
microscop confocal
1. Microscopul confocal adaugă o semi-lentila semi-reflectorizantă pe calea optică a luminii reflectate, care refractă lumina reflectată care a trecut prin lentilă în alte direcții. Există un deflector cu un orificiu la focalizare, iar orificiul este situat în punctul focal, în spatele deflectorului, este un tub fotomultiplicator. Se poate imagina că lumina reflectată înainte și după focalizarea luminii de detectare trece prin acest sistem confocal și nu poate fi focalizată pe gaura mică și va fi blocată de deflector. Deci ceea ce măsoară fotometrul este intensitatea luminii reflectate la focalizare.
2. Principiu: Microscoapele optice tradiționale folosesc surse de lumină de câmp, iar imaginea fiecărui punct de pe specimen va fi interferată de difracție sau de lumină împrăștiată din punctele adiacente; Microscoapele confocale cu scanare laser folosesc raze laser pentru a forma surse de lumină punctuale prin găuri de iluminare pentru a ilumina interiorul specimenului. Fiecare punct al planului focal este scanat, iar punctul iluminat de pe eșantion este fotografiat la orificiul de detectare, care este primit punct cu punct sau linie cu linie de tubul fotomultiplicator (PMT) sau de dispozitivul de cuplare la rece (cCCD) în spatele detectiei. orificiu, și este rapid O imagine fluorescentă se formează pe ecranul monitorului computerului. Orificiul de iluminare și orificiul de detectare sunt conjugate în raport cu planul focal al obiectivului. Punctele de pe planul focal sunt focalizate pe orificiul de iluminare și pe orificiul de emisie în același timp. Punctele din afara planului focal nu vor fi imagini la orificiul de detectare. Acest lucru se obține Imaginile confocale sunt secțiuni transversale optice ale specimenelor, depășind deficiențele imaginilor neclare în microscoapele obișnuite.
3. Domenii de aplicare: implică medicină, cercetare științifică a animalelor și plantelor, biochimie, bacteriologie, biologie celulară, embriologie tisulară, știința alimentelor, genetică, farmacologie, fiziologie, optică, patologie, botanică, neuroștiință, biologie marine și știința materialelor, știința electronică , mecanică, geologie petrolieră, mineralogie.
