Funcțiile fiecărui filtru într-un microscop cu fluorescență
Cea mai critică problemă cu microscopia cu fluorescență este combinația de filtre optice. Atât filtrul de excitație, cât și filtrul de ecranare trebuie să fie adecvate pentru materialul fluorescent observat și să se potrivească între ele. Pentru unele aplicații specifice, dacă există erori în selectarea filtrelor, poate duce la neînțelegeri și chiar la rezultate incorecte. Realizările tehnologiei de microscopie cu fluorescență sunt inseparabile de filtre-de înaltă calitate și de grupuri de filtre adaptate inteligent. Există mai multe tipuri de filtre pentru microscopia cu fluorescență.
1. Filtru de absorbție a căldurii
Filtrul de absorbție a căldurii este un filtru necesar pentru a împiedica radiația termică din spectrul sursei de lumină să afecteze sistemul optic. Microscoapele avansate timpurii erau echipate cu sticle în formă de tambur care puteau reține apă distilată ca dispozitive de absorbție a căldurii. Microscoapele moderne de cercetare-la scară largă sunt echipate cu filtre de absorbție a căldurii din sticlă în cutii luminoase ale surselor de lumină sau camere pentru lămpi, care sunt foi de sticlă transparente și ușor galbene. Filtrele Leitz KG1 (2 mm) și BG38 (4 mm) pot transmite aproape toate spectrele de lumină ultravioletă și vizibilă, cu o rată de transmisie a luminii de până la 98%. Absoarbe doar selectiv radiația fototermală infraroșie.
2. Filtru de excitare
Filtrele de excitație pot absorbi selectiv liniile spectrale cu lungimi de undă lungi și pot transmite doar lumina ultravioletă. Filtrele de lumină violet, albastru și verde sunt filtre de excitație. Zeiss, Reichert, seria B a lui Olympus, seria G, seria BG, seria UG a lui Shott, seria H, G, BP de la Opton, seria BP a lui Leitz și alte filtre optice sunt toate filtre de excitație.
3. Filtru de blocare
Un filtru de blocare este un filtru care absoarbe selectiv liniile spectrale de unde scurte și razele infraroșii, permițând în același timp să fie văzute undele mai lungi. Funcția sa este de a permite observatorului să vadă fluorescența excitată de obiectul inspectat, protejând în același timp corneea observatorului de deteriorarea UV.
4. Filtru de separare a culorilor
Filtrul de separare a culorilor este o oglindă cu filtru care reflectă lumina de excitație asupra obiectului inspectat, determinând obiectul să emită fluorescență și apoi transmite fluorescența către ocular. Acest tip de filtru poate fi folosit doar într-un condensator de lumină care căde, în timp ce un microscop cu fluorescență cu lumină transmisă nu necesită separarea culorilor.
5. Filtru de interferență
Filtrul de interferență este un tip de-filtru de excitație de înaltă performanță. Este un filtru realizat prin stivuirea mai multor filme subțiri de metal între două foi de sticlă lustruită. Indicele de refracție al fiecărui film subțire de metal este diferit, astfel încât liniile spectrale ale diferitelor lungimi de undă ale sursei de lumină de iluminare sunt reflectate în mod repetat pe fiecare film de metal. Unele linii spectrale de anumite lungimi de undă sunt anulate prin interferență distructivă, în timp ce altele sunt întărite prin interferență aditivă și transmise prin. Rezultă un filtru cu un spectru de transmisie îngust și o jumătate de lățime a vârfului de numai 6-20 nm. Transmitanța poate ajunge la 60% -70%.
