Microscoapele cu fluorescență pot fi împărțite în două tipuri în funcție de principiul căii luminii:
1. Microscop cu fluorescență cu transmisie
La microscoapele cu fluorescență mai vechi, sursa de lumină de excitație trece prin materialul eșantionului printr-un condensator pentru a excita fluorescența. Avantajul este că fluorescența este puternică la mărire scăzută, dar dezavantajul este că fluorescența slăbește pe măsură ce mărirea crește. Deci este potrivit doar pentru observarea materialelor specimene mai mari.
2.Microscopia cu epifluorescență
Lumina de excitație cade în jos de la lentila obiectiv pe suprafața specimenului, adică aceeași lentilă obiectiv este utilizată ca condensatorul de iluminare și lentila obiectiv pentru colectarea fluorescenței.
Un separator de fascicul dicroic (oglindă dicroică) trebuie adăugat la calea optică, care se află la un unghi de 45o față de axa optică. Lumina de excitație este reflectată în lentila obiectivului și concentrată pe eșantion. Fluorescența generată de probă este reflectată de suprafața lentilei obiectivului și a capacului. Lumina de excitație reflectată pe suprafața lamei de sticlă intră în lentila obiectivului în același timp și revine la separatorul de fascicul dicroic pentru a separa lumina de excitație și fluorescența. Lumina de excitație rămasă este apoi absorbită de filtrul de blocare. Dacă utilizați diferite inserții de combinație de filtru de excitație/divizor de fascicul cu două culori/filtru de blocare, puteți satisface nevoile diferitelor produse de reacție de fluorescență.
Avantajul acestui tip de microscop cu fluorescență este că câmpul vizual este iluminat uniform, imaginea este clară și cu cât mărirea este mai mare, cu atât fluorescența este mai puternică.
Care sunt principalele categorii de microscoape optice?
1. Microscop optic obișnuit
Microscoapele optice obișnuite sunt compuse în principal din următoarele părți: sistemul de iluminare, care implică sursa de lumină și condensatorul; sistemul optic de mărire, care este compus din obiectiv și ocular. Este cea mai critică parte a microscopului și este concepută pentru a evita aberația sferică excesivă și aberația cromatică, atât ocularul, cât și lentila obiectivului sunt compuse din grupuri complexe de lentile.
2. Microscop cu scanare confocal laser
Microscopul laser de scanare confocală sună foarte sofisticat și complicat. De fapt, pur și simplu folosește laserul ca sursă de lumină de scanare pentru a scana și imagine rapid obiectele punct cu punct, linie cu linie și suprafață după suprafață.
Pe baza lungimii de undă mai scurtă a fasciculului laser, fasciculul în sine este foarte subțire, ceea ce determină că microscopul de scanare laser confocal are o rezoluție ridicată, care este de aproximativ trei ori mai mare decât un microscop optic obișnuit. Acest tip de microscop este folosit pentru a observa morfologia celulară și pentru a analiza cantitativ componentele biochimice intracelulare și pentru a măsura morfologia celulară.
3. Microscop cu câmp întunecat
Există o placă de lumină în centrul condensatorului unui microscop cu câmp întunecat, care împiedică lumina de iluminare să intre direct în lentila obiectivului. Doar lumina reflectată și difractată de specimen poate pătrunde în lentila obiectivului. Prin urmare, fundalul câmpului vizual este negru, iar marginile obiectelor sunt luminoase.
