Funcționarea de bază a microscopului cu fluorescență
A. Stingeți luminile din cameră și porniți lampa cu mercur al microscopului;
b. Selectați filtrul corespunzător în funcție de fluoresceina marcată de probă;
c. Plasați proba și găsiți un câmp vizual adecvat;
d. Dacă trebuie să faceți fotografii, vă rugăm să confirmați că filmul color este instalat în cameră;
e. Porniți dispozitivul Selfie, selectați treapta manuală, de obicei viteza de fotografiere este în 0.5-10 secunde;
f. După utilizare, opriți toată puterea și faceți o înregistrare a utilizării. cel
cel
3. Metoda de înregistrare a imaginii cu fluorescență
Imaginea cu fluorescență văzută de microscopul cu fluorescență are atât caracteristici morfologice, cât și culoarea și luminozitatea fluorescenței. La evaluarea rezultatelor, cele două trebuie combinate pentru o judecată cuprinzătoare. Rezultatele sunt înregistrate pe baza indicatorilor subiectivi, adică a observației vizuale de către lucrători. Ca o observație calitativă generală, practic de încredere. Odată cu dezvoltarea tehnologiei și științei, indicatorii obiectivi sunt utilizați pentru a înregistra rezultatele judecății în diferite grade, cum ar fi spectrofotometrele celulare, analizoarele de imagine și alte instrumente. Cu toate acestea, rezultatele înregistrate de aceste instrumente trebuie să fie combinate și cu judecăți subiective. cel
Fotografia cu microscopul cu fluorescență este foarte necesară pentru înregistrarea imaginilor cu fluorescență. Deoarece fluorescența este ușor de estompat și slăbit, este necesar să se înregistreze rezultatele în timp real. Metoda este practic aceeași cu cea a fotomicrografiei obișnuite. Trebuie doar să utilizați film fotosensibil de mare viteză. Deoarece lumina ultravioletă are un efect puternic asupra stingerii fluorescenței, cum ar fi markerii FITC, luminozitatea fluorescenței va scădea cu 50% atunci când este iradiată cu lumină ultravioletă timp de 30 de secunde. Prin urmare, dacă viteza de expunere este prea mică, imaginea fluorescentă nu poate fi realizată. Microscoapele cu fluorescență de cercetare generală au dispozitive de sistem de fotomicrografie semiautomate sau complet automate. cel
cel
4. Precauții pentru utilizarea microscopiei cu fluorescență
A. Operați strict în conformitate cu cerințele instrucțiunilor din fabrică de microscop cu fluorescență și nu modificați programul după bunul plac. cel
b. Inspecția trebuie efectuată într-o cameră întunecată. După ce intri în camera întunecată, conectează sursa de alimentare și aprinde lampa cu mercur de ultra-înaltă presiune timp de 5-15 minute. După ce lumina puternică de la sursa de lumină este stabilă, ochii sunt complet adaptați la camera întunecată și apoi încep să observe specimenul. cel
c. Pentru a preveni deteriorarea ochilor de către razele ultraviolete, purtați ochelari de protecție atunci când reglați sursa de lumină. cel
d. Timpul de inspecție este de preferință de 1-2 ore de fiecare dată. Dacă depășește 90 de minute, intensitatea luminoasă a lămpii cu mercur de ultraînaltă presiune va scădea treptat și fluorescența se va slăbi; după ce specimenul este iradiat cu lumină ultravioletă timp de 3-5 minute, fluorescența va fi de asemenea slăbită semnificativ; prin urmare, nu ar trebui să depășească cel mult 2-3 ore. . cel
e. Durata de viață a sursei de lumină a microscopului fluorescent este limitată, iar specimenele trebuie verificate central pentru a economisi timp și pentru a proteja sursa de lumină. Când vremea este caldă, trebuie adăugate ventilatoare pentru a disipa căldura, iar becurile noi trebuie înregistrate de la începutul timpului de utilizare. Când doriți să o utilizați din nou după ce lampa este stinsă, trebuie să așteptați până când becul este suficient de răcit înainte de a-l aprinde. Evitați să aprindeți sursa de lumină de mai multe ori pe zi. cel
f. Observați specimenul imediat după colorare, deoarece fluorescența se va slăbi treptat în timp. Dacă specimenul este depozitat într-o pungă de plastic din polietilenă la 4 grade, timpul de slăbire a fluorescenței poate fi întârziat și evaporarea agentului de montare poate fi împiedicată. cel
g. Standardul de judecată al luminozității fluorescenței: este, în general, împărțit în patru niveluri, adică „-” înseamnă că nu poate fi văzută nicio fluorescență sau o fluorescență slabă. „plus” înseamnă că s-a văzut doar fluorescență clar vizibilă. „plus plus” înseamnă că este vizibilă o fluorescență strălucitoare. „plus plus plus” înseamnă fluorescență strălucitoare vizibilă.
