Principii experimentale ale metodei de numărare directă a microscopiei microbiene
Numărarea directă la microscop cu ajutorul unui hemocitometru este o metodă frecvent utilizată pentru numărarea microorganismelor. Avantajul acestei metode este că este intuitivă și rapidă. Așezați suspensia bacteriană (sau suspensia de spori) diluată corespunzător în camera de numărare între lamă și lama de acoperire a hemocitometrului și numărați la microscop. Deoarece volumul camerei de numărare este fix (0,1 mm2), acesta poate fi convertit în numărul total de microorganisme per unitate de volum pe baza numărului de microorganisme observate la microscop. Deoarece această metodă numără numărul total de bacterii vii și moarte, este numită și metoda numărului total de bacterii.
Un hemocitometru este de obicei o lamă specială cu patru fante care formează trei platforme. Platforma din mijloc este împărțită în două jumătăți printr-o canelură orizontală scurtă. Există o grilă pătrată gravată pe platformă pe fiecare parte. Fiecare grilă pătrată este împărțită în nouă pătrate mari. Pătratul mare din mijloc este sala de numărare. Numărarea microorganismelor are loc în camera de numărare. Structura hemocitometrului este prezentată în Figura Ⅷ-1.
Scara camerei de numărare are în general două specificații. Unul este un pătrat mare împărțit în 16 pătrate medii, iar fiecare pătrat mediu este împărțit în 25 de pătrate mici (Figura Ⅷ-2); celălalt este un pătrat mare. Grila pătrată este împărțită în 25 de pătrate medii, iar fiecare pătrat mediu este împărțit în 16 pătrate mici (Figura VIII-1, C). Dar indiferent de ce fel de tablă de numărare este, numărul de pătrate mici din fiecare pătrat mare este același, adică 16×25=400 pătrate mici, așa cum se arată în Figura Ⅷ-2.
Lungimea laterală a fiecărui pătrat mare este de 1 mm, deci aria fiecărui pătrat mare este de 1 mm2. După ce capacul de sticlă este acoperit, înălțimea dintre diapozitiv și capacul de sticlă este de 0,1 mm, deci volumul camerei de numărare este de 0,1 mm3.
Când numărați, de obicei numărați numărul total de bacterii în cinci pătrate medii, apoi găsiți valoarea medie a fiecărui pătrat din mijloc și apoi înmulțiți cu 16 sau 25 pentru a obține numărul total de bacterii dintr-un pătrat mare, apoi calculați Convertiți la numărul total de bacterii în 1 ml de soluție bacteriană.
