Descrieți în detaliu etapele de selecție și metodele sondelor fluorescente pentru microscopia confocală
În experimentele cu microscoape confocale, unii indicatori experimentali pot fi detectați folosind autofluorescența probei în sine sau substanțe exogene, dar majoritatea substanțelor care urmează să fie testate nu au fluorescență măsurabilă și trebuie marcate cu sonde fluorescente. Are un semnal fluorescent măsurabil. Deci, cum să alegeți sonde fluorescente pentru microscopia confocală?
1. Determinați indicatorii de testat în funcție de scopul experimentului
Odată ce indicele de detecție este determinat, se determină și intervalul de selecție al sondelor fluorescente. Se poate observa că alegerea sondei fluorescente de utilizat în experiment este determinată de scopul experimentului. De exemplu, dacă scopul experimentului este de a studia modificările ionilor de calciu din cardiomiocite atunci când apare fibrilația atrială, se poate determina că substanța care trebuie testată este ionii de calciu din cardiomiocite, iar gama de selecție a sondelor fluorescente este limitată la sonde de ioni de calciu care pot marca celulele vii. Ac.
2. Determinați gama de sonde fluorescente disponibile
Pentru substanțe sau indicatori experimentali noi, dacă scopul experimentului nu este explorarea de noi sonde fluorescente, puteți alege să aplicați sonde mature și metode de etichetare. Tipul sau gama de sonde fluorescente care pot eticheta substanța care urmează a fi testată poate fi determinată prin căutarea în literatura de specialitate sau cataloagele de produse ale companiilor de reactivi binecunoscute din țară și din străinătate.
3. Investigați dacă caracteristicile sondei fluorescente îndeplinesc cerințele pentru prepararea probelor fluorescente
Caracteristicile sondelor fluorescente afectează direct etichetarea probelor și rezultatele experimentale. Prin urmare, înainte de a selecta sondele fluorescente și de a marca probele în experiment, este necesar să se înțeleagă pe deplin caracteristicile lor de fluorescență. Caracteristicile sondelor fluorescente care trebuie investigate includ:
1. Caracteristicile de reacție ale sondelor și probelor de lumină
2. Sensibilitatea și intensitatea fluorescenței sondelor fluorescente
3. Proprietăţi spectrale ale probelor marcate cu sonde fluorescente
4. Stabilitatea fluorescenței
5. Interacțiunea dintre fluorescența multiplă din probă
