Structura și componentele principale ale unui microscop cu fluorescență
Microscopia cu fluorescență este un instrument esențial în citochimia imunofluorescentă. Este compus din componente principale, cum ar fi sursa de lumină, sistemul cu plăci de filtrare și sistemul optic. Este de a folosi o anumită lungime de undă a luminii pentru a excita specimenul să emită fluorescență și pentru a observa imaginea de fluorescență a specimenului prin amplificarea lentilei obiectivului și a sistemului de ocular.
Structura și componentele principale ale unui microscop cu fluorescență
(1) Sursă de lumină
În zilele noastre, lămpile cu mercur de ultra-înaltă presiune de 200 W sunt adesea folosite ca surse de lumină. Sunt din sticlă de cuarț, cu formă sferică la mijloc, iar în interior se umple o anumită cantitate de mercur. În timpul lucrului, descărcarea dintre cei doi electrozi face ca mercurul să se evapore, iar presiunea aerului din minge crește rapid. Când mercurul este complet evaporat, poate atinge 50-70 presiunea atmosferică standard, iar acest proces durează în general aproximativ 5-15 minute. Luminescența lămpii cu mercur de ultra-înaltă presiune este rezultatul emisiei de cuante de lumină în timpul disocierii și reducerii continue a moleculelor de mercur prin descărcarea dintre electrozi. Emite lumină ultravioletă puternică și albastru-violetă, care este suficientă pentru a excita diferite substanțe fluorescente, deci este utilizat pe scară largă în microscopia cu fluorescență.
Lămpile cu mercur de ultra-înaltă presiune emit, de asemenea, multă căldură. Prin urmare, casa lămpii trebuie să aibă condiții bune de disipare a căldurii, iar temperatura mediului de lucru nu trebuie să fie prea mare.
Noua lampă cu mercur de ultra-înaltă presiune poate fi aprinsă fără tensiune înaltă la începutul utilizării. După o perioadă de utilizare, trebuie pornit la tensiune înaltă (aproximativ 15000V). După pornire, tensiunea de lucru de întreținere este în general 50-60V, iar curentul de lucru este de aproximativ 4A. Durata medie de viață a unei lămpi cu mercur de ultra-înaltă presiune de 200 W este de aproximativ 200 de ore dacă este utilizată timp de 2 ore de fiecare dată. Cu cât timpul de lucru este mai scurt, cu atât durata de viață este mai scurtă. Dacă este folosit doar 20 de minute, durata de viață va fi redusă cu 50%. Prin urmare, minimizați numărul de porniri atunci când îl utilizați. În timpul utilizării becului, eficacitatea sa luminoasă este redusă treptat. După ce lumina se stinge, așteptați să se răcească înainte de a reporni. Nu opriți becul imediat după aprindere, pentru a nu deteriora electrodul din cauza evaporării incomplete a mercurului. În general, trebuie să aștepte 15 minute. Datorită presiunii ridicate a lămpii cu mercur de ultra-înaltă presiune și a razelor ultraviolete puternice, becul trebuie plasat în camera lămpii înainte de a putea fi aprins, pentru a nu deteriora ochii și a provoca funcționarea în cazul unei explozii. .
Circuitul lămpii cu mercur de ultra-înaltă presiune (100W sau 200W) sursei de lumină și mai multe părți, inclusiv transformator, balast și pornire. Există un sistem de reglare a centrului luminos al becului în camera lămpii. În spatele becului este instalat un reflector concav placat cu aluminiu, iar în față este instalată o lentilă de colectare a luminii.
Lampa internă cu mercur de ultra-înaltă presiune GCQ-200 are performanțe bune și poate înlocui becurile importate, cum ar fi HBO-200. Durata medie de viață este de peste 200 de ore, iar prețul este relativ scăzut.
Un dispozitiv simplu și portabil cu sursă de lumină fluorescentă cu brom, tungsten, cu temperatură înaltă de culoare, dezvoltat în țara mea, are dimensiuni mici, greutate redusă, putere redusă, dublă utilizare AC și DC (cu sursă de alimentare CC), ușor de transportat, ușor de utilizat și are a fost popularizată și aplicată.
(2) Sistem de filtrare color
Sistemul de filtru color este o parte importantă a microscopului cu fluorescență, care constă dintr-o placă de filtru de excitație și o placă de filtru de presare. Modelul plăcii de filtrare și numele fiecărui producător nu sunt adesea uniforme. Plăcile filtrante sunt denumite în general după culoarea de bază, literele din față reprezintă culoarea, literele din spate reprezintă sticla, iar cifrele reprezintă caracteristicile modelului. microscopul olimpului
(3) Lentila obiectiv
Pot fi utilizate diverse lentile obiective, dar sunt folosite lentile obiective acromatice deoarece autofluorescența lor este minimă și proprietățile lor de transmisie a luminii (gama de lungimi de undă) sunt potrivite pentru fluorescență. Deoarece luminozitatea de fluorescență a imaginii în câmpul vizual al microscopului este proporțională cu pătratul raportului de deschidere al lentilei obiectiv și invers proporțională cu mărirea acesteia, pentru a îmbunătăți luminozitatea imaginii cu fluorescență, un obiectiv cu o lentilă mare trebuie utilizat raportul de deschidere. Mai ales la mărire mare efectul său este foarte evident. Prin urmare, pentru specimenele cu fluorescență insuficientă, trebuie utilizată o lentilă obiectiv cu un raport de deschidere mare cu un ocular cât mai scăzut posibil (4×, 5×, 6,3× etc.).
(4) Oglindă
Stratul reflectorizant al reflectorului este în general placat cu aluminiu, deoarece aluminiul absoarbe mai puțin în regiunea albastru-violet a luminii ultraviolete și a luminii vizibile, iar reflexia este mai mare de 90%, în timp ce reflexia argintului este de doar 70%. În general, se folosește un reflector plat.
(5) Condensator
Condensatoarele proiectate pentru microscopia cu fluorescență sunt fabricate din sticlă de cuarț sau altă sticlă transparentă UV. Există două tipuri de condensatoare cu câmp clar și condensatoare cu câmp întunecat. Există și concentratoare de fluorescență cu contrast de fază.
(6) Dispozitiv Epi-light
Noul tip de dispozitiv epi-light este că, după ce lumina de la sursa de lumină lovește filtrul spectroscopic de interferență, partea cu lungime de undă scurtă (ultraviolet și albastru violet) este reflectată datorită proprietăților acoperirii de pe filtru. Când filtrul este îndreptat spre sursa de lumină, unghiul este de 45. Când este înclinat, acesta trage spre lentila obiectivului pe verticală și trage spre specimen prin lentila obiectiv, astfel încât specimenul este excitat. În acest moment, obiectivul acționează direct ca un colector de lumină. În același timp, partea lungă a filtrului (verde, galben, roșu etc.) este transparentă pentru filtru, deci nu se reflectă în direcția lentilei obiectivului, iar filtrul acționează ca o placă de filtru de excitație, deoarece fluorescența specimenului se află în regiunea cu lungime de undă lungă a luminii vizibile, poate trece prin filtru și poate ajunge la ocular pentru observare, luminozitatea imaginii fluorescente crește odată cu creșterea măririi și este mai puternică decât lumina transmisă sursă la mărire mare. Pe lângă funcția de sursă de lumină de transmisie, este mai potrivit pentru observarea directă a specimenelor opace și translucide, cum ar fi felii groase, membrane de filtrare, colonii și specimene de cultură de țesut. Noile microscoape cu fluorescență dezvoltate în ultimii ani folosesc în mare parte dispozitive de epi-lumină, care sunt numite microscoape de epi-fluorescență.
