Diferențele și caracteristicile microscopului cu fluorescență și microscopului optic obișnuit
Microscopul cu fluorescență și microscopul optic obișnuit sunt diferite, nu prin iluminarea sursei obișnuite de lumină pentru a observa specimenul, ci prin utilizarea unei anumite lungimi de undă a luminii (de obicei ultraviolete, lumină albastră-violetă) excitarea materialului fluorescent din specimen. sub microscop, astfel încât fluorescența sursei de lumină a microscopului cu fluorescență să nu joace o iluminare directă, ci ca un fel de excitare a materialului fluorescent în specimenul sursei de energie. Motivul pentru care putem observa specimenul nu se datorează iluminării sursei de lumină, ci fenomenului de fluorescență prezentat de materialul fluorescent din specimen după absorbția energiei luminoase de excitație. Se poate observa că caracteristicile microscopului cu fluorescență, în principal sursa sa de lumină, pot furniza un număr mare de intervale de lungimi de undă specifice ale luminii de excitație, astfel încât materialul fluorescent din specimenul examinat să poată obține intensitatea necesară a luminii de excitație. În același timp, microscopul cu fluorescență trebuie să aibă un sistem de filtrare corespunzător. Microscopul cu fluorescență este instrumentul de bază pentru histochimia fluorescenței. Este compus dintr-o sursă de lumină de ultra-înaltă presiune, sistem de filtru (inclusiv placa de filtru de excitare și suprimare), sistem optic și sistem fotografic și alte componente majore, este utilizarea unei anumite lungimi de undă a luminii pentru a stimula specimenul să emită fluorescență.
1. Modul de excitare fluorescentă: în funcție de lungimea de undă a luminii, este împărțit în metoda de excitare UV (folosind iluminarea ultravioletă) și metoda de excitare BV (folosind lumină albastră violetă) două tipuri de metoda de excitare UV este mai scurtă de 400 nm lângă lumina ultravioletă pentru excitaţie. Nu există lumină de excitație vizibilă în această metodă, astfel încât fluorescența observată arată fluorescența inerentă a colorantului și este ușor să distingem fluorescența specifică pe specimen de auto-fluorescența țesutului de fundal.
2. Metoda de excitare BV: Metoda este centrată pe 404nm, 434nm de la lumina ultravioletă la lumina albastră pentru excitare. Această metodă folosește lumină albastră pentru a iradia specimenul, astfel încât filtrul de tăiere al sistemului de observare a fluorescenței trebuie să folosească un filtru care poate bloca complet lumina albastră și poate trece în mod adecvat fluorescența verde și galbenă dorită. Pigmenți fluorescenți pentru metoda anticorpilor fluorescenți. Deoarece lungimea de undă a absorbției maxime a luminii de excitație și lungimea de undă a emisiei maxime a fluorescenței sunt apropiate una de cealaltă, filtrele utilizate în metoda de excitație BV trebuie să fie filtre de tăiere ascuțite. Această metodă folosește lumina albastră ca lumină de excitație, astfel încât eficiența de absorbție a fluorocromului este mai mare și se poate obține o imagine mai luminoasă. Dezavantajul este că fluorescența sub 500 nm nu poate fi văzută, iar peste 500 nm întreaga imagine apare galbenă. În metoda anticorpilor fluorescenți, cea mai mare parte a specificității este judecată după culoarea unică a fluorocromului, astfel încât dezavantajele metodei de excitare a BV descrise mai sus tind să fie extrem de influente atunci când se discută specificitatea subtilă.
