Principiul de funcționare al microscopului confocal laser
Microscopia confocală cu laser se bazează pe imagistica cu microscop cu fluorescență cu adăugarea unui dispozitiv de scanare cu laser, utilizarea procesării imaginilor pe computer, rezoluția imaginii optice a crescut cu 30% - 40%, utilizarea excitației luminii ultraviolete sau vizibile a fluorescentei sonde, astfel încât să se obțină imaginea de fluorescență a microstructurii interne a celulelor sau țesuturilor, la nivel subcelular pentru a observa semnale fiziologice și modificări ale morfologiei celulare, cum ar fi Ca2+, PH, potențial de membrană etc., a devenit o nouă generație de instrumente de cercetare puternice în morfologie, biologie moleculară, neuroștiință, farmacologie, genetică și alte domenii. Sistemul de imagistică confocală laser este o nouă generație puternică de instrumente de cercetare în domeniile morfologiei, biologiei moleculare, neuroștiințe, farmacologie, genetică și așa mai departe. Sistemul de imagistică confocală cu laser poate fi utilizat pentru a observa o varietate de țesuturi și celule colorate, necolorate și marcate fluorescent etc., pentru a observa și a studia creșterea și dezvoltarea secțiunilor de țesut și a celulelor in vivo și pentru a studia și măsura intracelular transportul substantelor si conversia energiei. Este capabil să efectueze studiul modificărilor ionilor și ale pH-ului în celulele vii (RATIO), cercetarea neurotransmițătorilor, tomografia cu interferență diferențială și fluorescență, tomografia cu fluorescență multiplă și suprapunerea, analiza prin spectroscopie cu fluorescență a indicatorilor de fluorescență a analizei cantitative a probelor de fluorescență de timp- scanarea întârziată și componentele dinamice ale structurii dinamice tridimensionale a țesuturilor și celulelor, analiza transferului energiei de rezonanță fluorescentă, cercetarea hibridizării in situ fluorescenței (FISH), cercetarea citoscheletului (FISH) și studiul citoscheletului. FISH), cercetarea citoscheletului, cercetarea localizării genelor, analiza in situ a produselor PCR în timp real, cercetarea de recuperare cu albire prin fluorescență (FRAP), cercetarea comunicării intercelulare, cercetarea inter-proteică, cercetarea asupra potențialului membranei și fluidității membranei etc., pentru a finaliza analiza analizei imaginilor și reconstrucției tridimensionale și alte analize.
Domenii de aplicare a sistemului de microscop confocal laser:
Implicând medicină, cercetare științifică a animalelor și plantelor, biochimie, **ologie, biologie celulară, embrion de țesut, știința alimentelor, genetică, farmacologie, fiziologie, optică, patologie, botanică, neuroștiință, biologie marine, știința materialelor, știință electronică, mecanică, petrol geologie, mineralogie.
Principii de baza
Microscopul optic tradițional folosește o sursă de lumină de câmp, imaginea fiecărui punct de pe specimen va fi interferată de difracția sau împrăștierea luminii din punctele învecinate; microscopul confocal laser folosește un fascicul laser prin orificiul de iluminare pentru a forma o sursă de lumină punctuală pentru a scana fiecare punct de pe planul focal al specimenului, punctul iradiat de pe specimen va fi fotografiat la orificiul de detectare și apoi va fi primit de către orificiul de detectare după tubul de multiplicare a punctelor (PMT) sau dispozitivul de electrocuplare la rece (cCCD), punct cu punct sau linie cu linie, și apoi să fie afișat rapid pe monitorul computerului. Primită punct cu punct sau linie cu linie de PMT sau cCCD în spatele orificiului sondei, imaginea fluorescentă se formează rapid pe ecranul monitorului computerului. Orificiul de iluminare și orificiul de detectare sunt conjugate în raport cu planul focal al lentilei obiectiv, punctele de pe planul focal sunt focalizate pe orificiul de iluminare și orificiul de emisie în același timp, iar punctele din afara planului focal nu vor să fie fotografiată la orificiul de detectare, astfel încât imaginea confocală obținută să fie o secțiune transversală optică a specimenului, ceea ce depășește dezavantajul neclarității imaginii microscopului obișnuit.
