Ce fel de microscop este folosit pentru a vedea forma celulelor microbiene
Un termen colectiv pentru toate organismele minuscule care sunt greu de observat de către indivizi cu ochiul liber. Microorganismele includ bacterii, viruși, ciuperci și câteva alge. (Cu toate acestea, unele microorganisme sunt vizibile cu ochiul liber, cum ar fi ciupercile aparținând ciupercilor, Ganoderma lucidum etc.) Virușii sunt un tip de „organisme necelulare” compuse din câteva componente precum acizii nucleici și proteinele, dar lor supravieţuirea trebuie să depindă de celulele vii. În funcție de diferitele medii care există, acestea pot fi împărțite în microorganisme procariote, microorganisme spațiale, microorganisme fungice, microorganisme de drojdie, microorganisme marine etc.
Rolul și daunele microorganismelor:
Unul dintre cele mai importante efecte ale microorganismelor asupra oamenilor este prevalența bolilor infecțioase. 50 la sută din bolile umane sunt cauzate de viruși. Istoria microbilor care cauzează boli umane este istoria luptei constante a ființelor umane cu ei. Ființele umane au făcut progrese mari în prevenirea și tratarea bolilor, dar continuă să apară infecții microbiene noi și care reapar, precum un număr mare de boli virale cărora le lipsesc medicamentele terapeutice eficiente. Mecanismul patogen al unor boli nu este clar. Abuzul unui număr mare de antibiotice cu spectru larg a provocat o presiune de selecție puternică, provocând mutații multor tulpini, ducând la apariția rezistenței la medicamente, iar sănătatea umană este amenințată de noi amenințări. Unii virusuri segmentate pot muta prin recombinare sau reasortare. Cel mai tipic exemplu este virusul gripal.
După cunoașterea definiției specifice a microorganismelor, ce tip de microscop ar trebui să folosească experimentatorul atunci când studiază microorganismele pentru a vedea și ce microscop poate fi folosit pentru a vedea mai bine și pentru a observa și analiza formele microbiene comune.
Invenția microscopului este de a putea vedea obiecte zâmbitoare care nu pot fi văzute cu ochiul liber. Dimensiunea microorganismelor este foarte mica, asa ca trebuie marite si observate cu ajutorul microscopului. În plus, există multe tipuri de microorganisme, așa că, practic, majoritatea microscoapelor optice pot. Pentru a observa microorganismele, următoarea întrebare este ce tip de microscop ar trebui utilizat pentru observarea și analiza microorganismelor. Microscoapele comune pentru observarea morfologiei microbiene includ microscoape biologice, microscoape cu contrast de fază, microscoape inversate, microscoape cu fluorescență și microscoape confocale. Microscop și așa mai departe.
Mai jos sunt descrise diferitele microscoape utilizate pentru observarea microorganismelor:
1. Microscop obișnuit
Lumina naturală sau lumina este folosită ca sursă de lumină, iar lungimea sa de undă este de aproximativ {{0}},4 μm. Rezoluția microscopului este de jumătate din lungimea de undă, adică 0,2 μm, iar cea mai mică imagine vizibilă cu ochiul liber este de 0,2 mm. Prin urmare, utilizarea unei oglinzi de ulei (imersie) pentru a mări de 1000 de ori poate mări particulele de 0,2 μm în 0,2 mm vizibile cu ochiul liber. Microscoapele optice obișnuite pot fi utilizate pentru observarea bacteriilor, actinomicetelor și ciupercilor.
2. Microscopia câmpului întunecat este folosită în mod obișnuit pentru a observa morfologia și mișcarea microbiană necolorate. După ce condensatorul de câmp întunecat este instalat în microscopul obișnuit, lumina nu poate pătrunde direct din mijloc, iar câmpul vizual este întunecat. Când specimenul primește lumină oblică de la marginea condensatorului, acesta poate fi împrăștiat, astfel încât microorganismele strălucitoare pot fi observate pe fundalul câmpului întunecat, cum ar fi bacteriile sau spirochetele.
3. Microscop cu contrast de fază Microscopul cu contrast de fază utilizează efectul de lumină al plăcii de diferență de fază pentru a schimba faza luminii și amplitudinea luminii directe și pentru a converti diferența de fază a luminii în diferență de intensitate a luminii. Sub un microscop cu contrast de fază, atunci când lumina trece printr-un specimen necolorat, diferența de fază luminoasă este cauzată de inconsecvența densității diferitelor părți ale specimenului și pot fi observate morfologia, structura internă și modul de mișcare a microorganismelor.
4. Microscop cu fluorescență Microscopul cu fluorescență este practic același cu microscopul optic obișnuit, principala diferență este sursa de lumină, filtrul și condensatorul. În prezent, majoritatea folosesc dispozitive epi-light, iar lămpile cu mercur de înaltă presiune sunt utilizate în mod obișnuit ca surse de lumină, care pot emite lumină ultravioletă sau albastru-violetă. Există două tipuri de filtre: filtru de excitație și filtru de absorbție. Pe lângă condensatoarele generale cu câmp luminos, condensatoarele cu câmp întunecat pot fi utilizate și în microscoapele cu fluorescență care utilizează lumină albastră pentru a îmbunătăți contrastul dintre fluorescență și fundal. Această metodă este aplicabilă la detectarea sau identificarea bacteriilor colorate cu pigmenți fluorescenți sau combinate cu anticorpi fluorescenți.
5. Microscoapele electronice folosesc fluxul de electroni ca sursă de lumină. În comparație cu lumina vizibilă, lungimea de undă este de zeci de mii de ori diferită, ceea ce îmbunătățește foarte mult rezoluția. Bobina magnetică este folosită ca sistem de amplificare optică, iar mărirea poate ajunge la zeci de mii sau sute de mii de ori. Este adesea folosit în particulele de virus. și observarea ultrastructurii bacteriene.
Observarea probelor microbiene necolorate:
Specimenele necolorate pot fi utilizate în general pentru a observa morfologia bacteriilor, puterea și mișcarea. Bacteriile sunt incolore și transparente atunci când nu sunt colorate și sunt observate la microscop în principal prin diferența dintre indicele de refracție al bacteriilor și mediul înconjurător. Bacteriile cu flageli se mișcă viguros, în timp ce bacteriile fără flageli prezintă mișcare browniană neregulată. Bacteriile viabile precum Treponema pallidum, Leptospira și Campylobacter au forme și modele de mișcare distincte, care au o semnificație diagnostică. Metodele utilizate în mod obișnuit sunt metoda scăderii presiunii, metoda scăderii suspendate și metoda capilară.
1. Metoda picăturii suspendate Aplicați vaselină în jurul orificiului concav al lamei de sticlă concavă curată, luați un inel de suspensie bacteriană cu o buclă de inoculare și puneți-l în centrul sticlei de acoperire, apoi aliniați orificiul concav al lamei de sticlă concavă cu picătura din centrul sticlei de acoperire și Puneți capacul, apoi întoarceți-l repede, apăsați ușor pe lamelă pentru a face să se lipească strâns de vaselina de pe marginea găurii concave și apoi observați sub o putere mare. microscop (sau câmp întunecat).
2. Luați un inel de suspensie bacteriană cu o ansă de inoculare și plasați-l în centrul unei lame de sticlă curată prin metoda căderii de presiune și acoperiți ușor suspensia bacteriană cu un pahar de acoperire, având grijă să evitați generarea de bule de aer și să preveniți suspensia bacteriană din revărsare. Observație în câmp luminos (sau câmp întunecat) sub un obiectiv de mare putere.
3. Metoda capilară este utilizată în principal pentru examinarea cineticii bacteriilor anaerobe. De obicei alegeți 60~70mm lungime. După sifonarea suspensiei de bacterii anaerobe printr-un capilar cu o deschidere de 0,5-1,0 mm, etanșați cele două capete ale capilarului cu o flacără. Capilarul a fost fixat pe lama de sticlă cu hârtie de plastic și observat sub o lentilă de mare putere în câmp întunecat.
Observarea specimenelor microbiene colorate cu un microscop:
După ce specimenul bacterian este colorat, datorită contrastului puternic de culoare dintre bacterii și mediul înconjurător, caracteristicile morfologice ale bacteriilor (cum ar fi dimensiunea, forma, aranjamentul etc.) ale bacteriilor și unele structuri speciale pot fi observate clar la un microscop optic obișnuit (cum ar fi capsule, flageli, spori etc.), iar bacteriile pot fi clasificate și identificate în funcție de reactivitatea colorării.
(1) Procedura generală de colorare bacteriană Procedura generală de colorare bacteriană este: frotiu (uscare)—fixare—colorare.
1. Frotiuri Pregătirea sângelui, secrețiilor, excrețiilor, fluidelor de puncție și culturilor lichide și frotiuri directe de peliculă subțire pe lamele de sticlă; autopsie sau țesuturi animale infectate, ungeți leziunea cu un tampon de bumbac pentru prelevare. Pentru prepararea coloniilor bacteriene sau a gazonului pe mediu solid, utilizați mai întâi o ansă de inoculare pentru a lua un inel de soluție salină normală și puneți-l în centrul lamei, apoi utilizați o ansă de inoculare sterilă pentru a lua o cantitate mică de cultură și a o macina. uniform în soluție salină normală și întindeți-l pe suprafețe vopsite mari sau mici de 1 cm2, lăsați-l să se usuce natural la temperatura camerei sau să se usuce lent la distanță.
2. Scopul fixării este de a ucide bacteriile, de a coagula proteina și structura bacteriană și de a facilita colorarea; promovează bacteriile să adere la lamă pentru a evita să fie spălate de apă în timpul spălării; schimba permeabilitatea bacteriilor la coloranți, ceea ce este benefic pentru structura celulelor bacteriene de colorare. Se fixează de obicei prin încălzire cu o flacără, iar frotiul uscat este trecut rapid prin flacără de 3 ori. Este mai bine să nu ardeți pielea de pe dosul mâinii atunci când atinge slide-ul.
3. Vopsirea În funcție de diferitele scopuri de inspecție, alegeți diferite metode de vopsire pentru vopsire. Când vopsiți, adăugați soluția de colorant în picături pentru a crește gradul de acoperire.
4. Mordant Orice substanță care poate spori afinitatea dintre colorant și obiectul vopsit, poate fixa colorantul pe obiectul vopsit și poate provoca o modificare a permeabilității membranei celulare se numește mordant. Utilizate în mod obișnuit sunt alaunul, acidul tanic, sărurile metalice și iodul etc., iar încălzirea este, de asemenea, folosită pentru a promova colorarea. Mordanții pot fi utilizați între colorarea primară și contracolorarea și pot fi utilizați și după fixare sau conținute în fixativ și colorare.
5. Decolorarea Orice agent chimic care poate elimina culoarea obiectului vopsit se numeste decolorant. Etanolul, acetona etc. sunt utilizate în mod obișnuit ca decoloranți. Agentul de decolorare poate detecta gradul de stabilitate al combinației de bacterii și coloranți, care poate fi utilizat pentru colorarea diferențială.
6. Contracolorarea Bacteriile sau structurile lor care au fost decolorate sunt adesea contracolorate cu o soluție de contracolorare pentru o observare ușoară. Culoarea soluției de contracolorare este diferită de cea a soluției primare de vopsire pentru a forma un contrast puternic. Contracolorarea nu trebuie să fie prea puternică, pentru a nu acoperi culoarea colorării inițiale.
