Care sunt cerințele eșantionului pentru microscopia cu lumină?
În procesul de pregătire a probei al microscopului optic, grosimea feliei de probă este între 2 și 25um; grosimea feliei microscopului electronic este în 50-100nm (cu excepția microscopului electronic de înaltă tensiune, grosimea probei poate ajunge la 1um), deci metoda de feliere utilizată nu este deloc aceeași.
În ceea ce privește purtătorul, purtătorul secțiunii de microscop optic este o lamă de sticlă, iar purtătorul secțiunii de microscop electronic este grila purtătoare.
În ceea ce privește fixarea, secțiunile de microscop optic sunt fixate cu un fixativ compus, în timp ce secțiunile de microscop electronic sunt fixate în mod repetat cu un singur fixativ.
În ceea ce privește colorarea, colorarea probelor optice este relativ simplă. În funcție de diferitele mostre de observare și de tipul de microscop optic, de obicei este suficient să folosiți niște pete fixe. Există multe metode pentru recolorarea probelor de microscop electronic și sunt, de asemenea, foarte complicate, cum ar fi colorarea negativă, colorarea cu argint și așa mai departe.
În ceea ce privește înglobarea, parafina, colodionul, gelatina etc. sunt utilizate ca agenți de înglobare pentru secțiunile de microscop optic; rășina epoxidica, rășina polistiren, rășina izobutilenă și rășina solubilă în apă sunt utilizate ca agenți de înglobare pentru secțiunile de microscop electronic.
Pentru ca câmpul vizual al microscopului să primească o iluminare uniformă și suficientă, este necesar să se ajusteze sistemul de cale optică de iluminare atunci când microscopul este instalat și depanat pentru prima dată. cerințe. În plus, înțelegerea corectă a ajustării sistemului de cale optică de iluminare este un pas necesar după înlocuirea becului în procesul de utilizare a microscopului și este, de asemenea, un mijloc necesar pentru a testa performanța microscopului din când în când în procesul de utilizare zilnică. Reglarea sistemului de cale optică de iluminare a microscopului include în principal următoarele 4 elemente: 1. Reglarea preliminară a camerei lămpii sursei de lumină în afara microscopului ① Mai întâi, deschideți carcasa camerei lămpii și puneți becul cu halogen în soclu apăsând clema cu arc. Murdăria, cum ar fi amprentele rămase pe bec, vor afecta durata de viață a becului. ②Așezați camera lămpii pe masă, după ce porniți alimentarea, utilizați o șurubelniță specială pentru a regla orificiul butonului de focalizare al lămpii (marcat cu „←→”), astfel încât filamentul să fie proiectat pe perete 1-2 m distanță, iar imaginea filamentului este ajustată. Apoi reglați înălțimea lămpii pentru a regla orificiul filamentului (marcat cu „──”) pentru a face poziția filamentului adecvată; apoi reglați orificiile șuruburilor de reglare a poziției stânga și dreaptă ale lămpii (marcate cu „──”) pentru a face poziția din stânga și dreapta a filamentului adecvată.
2. Scopul inspecției și corectării poziției iluminatorului (filamentului) sursei de lumină în microscop este de a regla capătul imaginii al iluminatorului în câmpul vizual al lentilei obiectivului și de a se asigura că câmpul de vedere al microscopului este recepționat complet și uniform din perspectiva sursei de lumină. Iluminarea, care este o condiție prealabilă pentru reglarea sistemului de iluminat Kühler. Instrumente de bază necesare: Telescoapele de centrare sunt echipate cu achiziționarea de microscop. ① Deconectați manșonul din sticlă mată din carcasa lămpii și puneți carcasa lămpii înapoi pe microscop ② Selectați o lentilă obiectiv de 10×, porniți programul sursă de lumină pentru a găsi proba și reglați clar focalizarea, apoi utilizați un obiectiv de 40× obiectiv pentru a focaliza în mod clar eșantionul (obiectiv 40× Întreaga imagine a filamentului poate fi văzută clar); ③ Deschideți la maximum atât diafragma de deschidere, cât și diafragma de câmp a condensatorului; ④ Deconectați unul dintre oculare, înlocuiți-l cu un telescop de centrare, apucați partea albă și extindeți ocularul negru cu cealaltă mână. Imaginea filamentului poate fi văzută în câmpul vizual; ⑤Dacă poziția filamentului nu este adecvată, reglați gaura „──”, reglați imaginea filamentului în direcția orizontală, reglați gaura „──” și reglați imaginea filamentului în direcția verticală până când Ajustați imaginea filamentului într-o formă circulară imagine care doar umple deschiderea obiectivului; ⑥ După reglare, introduceți manșonul din sticlă mată înapoi în poziția inițială, deconectați telescopul de centrare și înlocuiți ocularul pentru următoarea reglare. Ajustarea menționată mai sus a încăperii lămpii sursei de lumină de iluminare în afara microscopului și calibrarea poziției iluminatorului sursei de lumină în interiorul microscopului trebuie efectuate numai atunci când microscopul este instalat și depanat pentru prima dată și becul este înlocuit. În caz de confuzie, îl puteți readuce la starea inițială conform pașilor de mai sus.
3. Reglarea corectă a sistemului de iluminare Kohler (Kohler) Reglarea corectă a microscopului, una dintre sarcinile principale este reglarea sistemului de iluminare de iluminare, iar cheia este reglarea sistemului de iluminare Kohler. Pentru toți cei care folosesc microscoape, în special cei care fac micrografii, ar trebui să aibă o anumită înțelegere și stăpânire a principiilor sistemului de iluminare Kühler și a etapelor de reglare a acestuia, astfel încât să poată juca pe deplin funcțiile microscopului. Fotografiile rezultate pot fi mai consistente și perfecte în efect. Principiul sistemului de iluminare Kühler este simplu: lumina emisă de orice punct al iluminatorului sursei de lumină poate ilumina câmpul vizual al microscopului, iar lumina emisă de fiecare punct al iluminatorului sursei de lumină este colectată și este în câmpul vizual al microscopului. Se obține o iluminare foarte suficientă și uniformă. Scopul ajustării sistemului de iluminare Kuhler este de a obține o iluminare uniformă și suficientă pentru câmpul vizual observat și de a preveni ca lumina parazită să afecteze sau să interfereze cu sistemul de imagistică, astfel încât să se evite formarea de ceață pe negativ în timpul fotografierii. Componentele esențiale ale unui sistem de iluminare Kühler cu reglare ridicată: diafragmă de câmp, sistem condensator cu reglare pe axă. ① Selectați 10× obiectiv obiectiv și 10× ocular ② Puneți lentila frontală a condensatorului pe calea optică, reglați diafragma de deschidere într-o poziție moderată (nu prea mare sau nu prea mică), apoi ridicați condensatorul în poziția de sus și reglați placa turnantă a condensatorului în poziția Bright field „J” ③ Reglați diafragma de câmp la minim (0,1)
④ Puneți proba biologică sigilată pe scenă, porniți sursa de lumină și focalizați clar
⑤ În câmpul vizual va apărea o zonă iluminată local sau un punct luminos, care este o imagine neclară a diafragmei de câmp, în care detaliile probei pot fi văzute clar; Vedeți clar detaliile eșantionului
⑥ Coborâți ușor condensatorul, astfel încât punctul luminos din câmpul vizual să se îngusteze treptat și să devină treptat o imagine poligonală clară, care este imaginea clară a diafragmei de câmp;
⑦ În circumstanțe normale, imaginea poligonală nu se află în centrul câmpului vizual. Este necesar să reglați o pereche de șuruburi de centrare ale condensatorului pentru a regla imaginea poligonală a câmpului vizual la poziția centrală;
⑧ Deschideți treptat diafragma câmpului vizual pentru a face ca imaginea poligonală să devină un poligon înscris al câmpului vizual și verificați în continuare starea de aliniere. Dacă alinierea nu este ideală, continuați să reglați ușor șurubul de aliniere;
⑨ Deschideți ușor diafragma de câmp pentru a face imaginea poligonală să dispară pe marginea câmpului vizual. În acest moment, reglarea sistemului de iluminat Kühler este finalizată. După ce sistemul de iluminare Kühler a fost ajustat, întregul câmp vizual a fost iluminat uniform, iar micrografiile au fost luminoase și clare, cu contrast normal.
