Există două tipuri de microscoape cu fluorescență în funcție de calea lor optică:
1. Microscop cu fluorescență cu transmisie: Sursa de lumină de excitație este transmisă prin materialul specimenului printr-un condensator pentru a excita fluorescența. Colectoarele de lumină în câmp întunecat utilizate în mod obișnuit sau colectoarele obișnuite de lumină pot fi utilizate pentru a regla reflectorul pentru a converti lumina de excitație și lumina laterală pe specimen. Acesta este un microscop cu fluorescență relativ demodat. Avantajul său este că fluorescența este puternică la mărire scăzută, în timp ce dezavantajul său este că fluorescența slăbește pe măsură ce mărirea crește. Prin urmare, este mai bine pentru observarea materialelor specimene mai mari.
2. Microscop cu fluorescență cu fascicul în cădere Acesta este un nou tip de microscop cu fluorescență dezvoltat în timpurile moderne. Spre deosebire de cea precedentă, lumina de excitație cade de la lentila obiectiv la suprafața specimenului, folosind aceeași lentilă de obiectiv ca și condensatorul de iluminare și lentila obiectiv pentru colectarea fluorescenței. Un separator de fascicul de culoare dublă trebuie adăugat la calea optică, care este la un unghi de 45 de grade față de uraniul ușor. Lumina de excitație este reflectată în lentila obiectivului și concentrată pe eșantion. Fluorescența generată de probă, precum și lumina de excitație reflectată de suprafața lentilei obiectivului și a sticlei de acoperire, intră simultan în lentila obiectivului și revin la separatorul de fascicul dicroic, separând excitația și fluorescența. Excitația reziduală este apoi absorbită de filtrul de blocare. Dacă sunt utilizate diferite filtre de excitație/separatoare de fascicule cu două culori/combinații de filtre de blocare, acestea pot satisface nevoile diferitelor produse de reacție fluorescente. Avantajul acestui microscop fluorescent este că iluminarea câmpului vizual este uniform, imaginea este clară și cu cât mărirea este mai mare, cu atât fluorescența este mai puternică.
（2） Utilizarea microscopului cu fluorescență
1. Porniți sursa de lumină, iar lampa cu mercur de ultra-înaltă presiune trebuie preîncălzită timp de câteva minute pentru a atinge apogeul.
2. Microscopul cu fluorescență cu transmisie necesită instalarea filtrului de excitație necesar între sursa lămpii și condensator, iar filtrul de blocare corespunzător să fie instalat în spatele lentilei obiectivului. Microscopul cu fluorescență cu fascicul descendent trebuie să introducă filtrul de excitație necesar/separatorul de fascicul dublu de culoare/blocul filtrului de blocare în fanta căii optice.
3. Observați cu un microscop de putere redusă și reglați centrul sursei de lumină în funcție de dispozitivele de reglare ale diferitelor modele de microscoape cu fluorescență, astfel încât să fie situat în centrul întregului punct de iluminare.
4. Așezați feliile de specimen și focalizați-le pentru a le observa. În timpul utilizării, trebuie remarcat faptul că filtrul final nu trebuie observat direct cu ochii pentru a evita afectarea ochilor; La observarea specimenelor cu un microscop cu ulei, trebuie utilizat un microscop special cu ulei nefluorescent; După ce lampa cu mercur de înaltă presiune este oprită, aceasta nu poate fi aprinsă imediat din nou. Trebuie să dureze 5 minute pentru a porni din nou, altfel va fi instabilă și va afecta durata de viață a lămpii cu mercur.
(3) Observând sub un microscop cu fluorescență pe platforma de predare folosind un filtru de lumină albastru violet, se poate observa că celulele colorate cu colorant fluorescent portocaliu acridină 0,01%, nucleul și citoplasma sunt stimulate pentru a produce două diferite culori de fluorescență (verde închis și roșu portocaliu).
