Rolul fiecărui filtru în microscopia cu fluorescență
Cea mai importantă problemă cu microscopia cu fluorescență este combinația de filtre și atât filtrul de excitare, cât și filtrul de ecranare trebuie să fie potrivite pentru corpul fluorescent observat și să se potrivească între ele. În anumite scopuri specifice, dacă există o eroare în selectarea unui filtru, aceasta poate duce la neînțelegeri și chiar la rezultate incorecte. Realizările tehnologiei microscopiei cu fluorescență și utilizarea filtrelor de înaltă calitate și a grupurilor de filtre ingenioase sunt inseparabile. Există mai multe tipuri de filtre pentru microscopia cu fluorescență.
1. Filtru de absorbție a căldurii
Filtrul de absorbție a căldurii este un filtru necesar pentru a împiedica radiația termică din spectrul sursei de lumină să afecteze grupul de dispozitive optice. Microscoapele avansate timpurii erau echipate cu sticle în formă de tambur care puteau reține apă distilată ca dispozitive de absorbție a căldurii. Microscoapele moderne de cercetare la scară largă sunt echipate cu filtre de absorbție a căldurii din sticlă în cutii sau camere de lumină cu surse de lumină, care sunt foi de sticlă transparente, ușor galbene. Filtrele Leitz KG1 (2 mm) și BG38 (4 mm) pot transmite aproape toate spectrele de lumină ultravioletă și vizibilă, făcându-le filtre cu un flux de lumină de până la 98%. Absoarbe doar selectiv liniile de radiație fototermală în infraroșu.
2. Filtru de excitare
Filtrele de excitație pot absorbi selectiv liniile spectrale cu lungimi de undă lungi și pot transmite doar lumina ultravioletă. Filtrele pentru lumina violet, albastră și verde sunt filtre de excitație. Zeiss, Reichert, Olympus seria B, seria G, seria BG, seria Shott UG, seria Opton H, G, seria BP, seria Leitz BP și alte filtre sunt toate filtre de excitație.
3. Filtru de blocare
Filtrul de blocare este un filtru care absoarbe selectiv liniile spectrale cu lungime de undă scurtă și radiația infraroșie, permițând observatorului să vadă fluorescența emisă de obiectul testat, protejând în același timp corneea de deteriorarea UV.
4. Filtru de separare a luminii de culoare
Filtrul de separare a luminii colorate este un filtru care reflectă lumina de excitație asupra obiectului testat, determinând obiectul să emită fluorescență și apoi transmite fluorescența către ocular. Acest tip de filtru poate fi utilizat numai în concentratoarele cu fascicul descendent, în timp ce microscopia cu fluorescență cu lumină de transmisie nu necesită separarea culorilor.
5. Filtru de interferență
Filtrul de interferență este un tip de filtru de excitație de înaltă performanță. Este un filtru realizat prin stivuirea mai multor folii subțiri de metal între două foi de sticlă lustruită. Indicele de refracție al fiecărei pelicule de metal subțire este diferit, astfel încât liniile spectrale cu lungimi de undă diferite ale sursei de lumină de iluminare sunt reflectate în mod repetat pe fiecare peliculă metalică, determinând anularea unor lungimi de undă ale liniilor spectrale din cauza interferenței distructive, în timp ce altele sunt întărite de interferență aditivă și transmisă prin. Rezultă un filtru cu un spectru de transmisie îngust, o jumătate de lățime a vârfului de numai 6 ~ 20 nm și o transmisie de 60% ~ 70%.
