Principiul și caracteristicile structurale ale microscopului cu fluorescență
Microscopia cu fluorescență folosește un punct cu eficiență luminoasă ridicată pentru a emite lumină cu o anumită lungime de undă (cum ar fi lumina ultravioletă 3650 inchi sau lumină albastră violet 4200 inchi) prin sistemul de filtrare ca lumină de excitație pentru a excita substanțele fluorescente din specimen pentru a emite fluorescență de diverse culori După aceea, observați prin mărirea lentilei obiectivului și a ocularului. În acest fel, sub un fundal de contrast puternic, chiar dacă fluorescența este foarte slabă, este ușor de identificat și are o sensibilitate ridicată. Este utilizat în principal pentru cercetarea structurii și funcției celulare și a compoziției chimice. Structura de bază a unui microscop cu fluorescență este compusă dintr-un microscop optic obișnuit plus unele accesorii (cum ar fi o sursă de lumină fluorescentă, un filtru de excitație, un divizor de fascicul cu două culori și un filtru de blocare etc.). Sursă de lumină fluorescentă—utilizați în general o lampă cu mercur de ultra-înaltă presiune (50-200W), care poate emite lumină de diferite lungimi de undă, dar fiecare substanță fluorescentă are o lungime de undă de excitație care produce cea mai puternică fluorescență, deci un filtru de excitație ( În general, există filtre de excitație ultraviolete, violete, albastre și verzi), care permit doar trecerea luminii de excitație cu o anumită lungime de undă și iradierea specimenului, absorbind în același timp altă lumină. După ce fiecare substanță este iradiată de lumina de excitație, emite fluorescență vizibilă cu o lungime de undă mai mare decât lungimea de undă de iradiere într-un timp foarte scurt. Fluorescența este specifică și în general mai slabă decât lumina de excitație. Pentru a observa fluorescența specifică, blocarea (sau suprimarea) trebuie adăugată în spatele lentilei obiectivului și utilizată împreună cu aceasta.
Diferența dintre microscopul cu fluorescență și microscopul obișnuit
1. Metoda de iluminare este de obicei episcopică, adică sursa de lumină este proiectată pe probă prin lentila obiectivului;
2. Sursa de lumină este lumină ultravioletă, lungimea de undă este mai scurtă și rezoluția este mai mare decât cea a microscoapelor obișnuite;
3. Există două filtre speciale, cel din fața sursei de lumină este folosit pentru a filtra lumina vizibilă, iar cel dintre ocular și lentila obiectiv este folosit pentru a filtra razele ultraviolete pentru a proteja ochiul uman.
Microscopul cu fluorescență este, de asemenea, un fel de microscop optic, principala diferență este că lungimea de undă de excitație a celor două este diferită. Aceasta determină diferența dintre microscopul cu fluorescență și microscopul optic obișnuit în ceea ce privește structura și utilizarea.
Microscopia cu fluorescență este un instrument esențial în citochimia imunofluorescentă. Este compus din componente principale, cum ar fi sursa de lumină, sistemul cu plăci de filtrare și sistemul optic. Este de a folosi o anumită lungime de undă a luminii pentru a excita specimenul să emită fluorescență și pentru a observa imaginea de fluorescență a specimenului prin amplificarea lentilei obiectivului și a sistemului de ocular.
