Principiul și caracteristicile structurale ale microscopiei cu fluorescență
Microscopia cu fluorescență folosește un punct cu eficiență luminoasă ridicată pentru a emite o anumită lungime de undă a luminii (cum ar fi lumina ultravioletă de 3650 inchi sau lumină albastră violetă de 4200 inchi) printr-un sistem de filtrare a culorilor ca lumină de excitație și excită substanțele fluorescente din probă pentru a emite diverse culorile fluorescentei. După aceea, se observă prin mărirea obiectivului și a ocularului. În acest fel, este ușor de recunoscut chiar și atunci când fluorescența este foarte slabă pe un fundal puternic, cu sensibilitate ridicată. Este utilizat în principal pentru studiul structurii și funcției celulare, precum și al compoziției chimice. Structura de bază a unui microscop cu fluorescență este compusă dintr-un microscop optic obișnuit plus accesorii, cum ar fi o sursă de lumină fluorescentă, filtru de excitație, separator de fascicul dicroic și filtru de blocare. Sursele de lumină fluorescente utilizează în general lămpi cu mercur de ultraînaltă presiune (50-200W), care pot emite lumină de diferite lungimi de undă. Cu toate acestea, fiecare substanță fluorescentă are o lungime de undă a luminii de excitație care produce cea mai puternică fluorescență, astfel încât filtrele de excitație (de obicei filtre de excitație ultraviolete, violete, albastre și verzi) trebuie adăugate pentru a permite doar o anumită lungime de undă a luminii de excitație să pătrundă și să iradieze specimen, absorbind în același timp orice altă lumină. După ce a fost iradiată de lumina de excitație, fiecare substanță emite fluorescență vizibilă mai lungă decât lungimea de undă de iradiere într-un timp foarte scurt. Fluorescența are specificitate și este în general mai slabă decât lumina de excitație. Pentru a observa fluorescența specifică, este necesar să adăugați blocare (sau suprimare) în spatele lentilei obiectivului și să o utilizați în combinație.
Diferența dintre microscopul cu fluorescență și microscopul obișnuit
1. Metoda de iluminare este de obicei de tip cu fascicul descendent, în care sursa de lumină este proiectată pe probă printr-o lentilă obiectiv;
2. Sursa de lumină este lumină ultravioletă, cu o lungime de undă mai scurtă și rezoluție mai mare decât microscoapele obișnuite;
3.Există două filtre speciale, cel din fața sursei de lumină este folosit pentru a filtra lumina vizibilă, iar cel dintre ocular și lentila obiectiv este folosit pentru a filtra razele ultraviolete pentru a proteja ochiul uman.
Microscopia cu fluorescență este, de asemenea, un tip de microscopie optică, principala diferență fiind diferitele lungimi de undă de excitație. Aceasta determină diferențele de structură și utilizare între microscopia fluorescentă și microscopia optică obișnuită.
Microscopia cu fluorescență este un instrument de bază pentru citochimia imunofluorescenței. Este compus din componente principale, cum ar fi o sursă de lumină, un sistem cu plăci de filtrare și un sistem optic. Utilizează o anumită lungime de undă a luminii pentru a excita proba să emită fluorescență și o mărește printr-o lentilă obiectivă și un sistem de ocular pentru a observa imaginea fluorescentă a probei.
