Diferența dintre microscopul confocal laser și microscopul optic tradițional
Microscopia de fluorescență confocală cu scanare cu laser este un instrument de analiză moleculară și celulară relativ avansat, care utilizează computer, laser și tehnologie de procesare a imaginilor pentru a obține date tridimensionale ale probelor biologice. Este folosit în principal pentru a observa structura celulelor vii și modificările biologice ale unor molecule și ioni specifici, analize cantitative și determinare cantitativă în timp real.
Principiul microscopiei confocale laser: utilizați orificiul de iluminare plasat în spatele sursei de lumină și orificiul de detectare plasat în fața detectorului pentru a realiza iluminarea punctului și detectarea punctului. Lumina emisă de sursa de lumină prin orificiul de iluminare este focalizată pe un punct de pe planul focal al probei, iar fluorescența emisă din acest punct este imaginea pe orificiul de detectare, iar orice lumină emisă în afara acestui punct este blocată de detectare. gaură. Orificiul de iluminare și orificiul de detectare sunt conjugate cu punctul iradiat sau punctul detectat, astfel încât punctul detectat este punctul confocal, iar planul în care se află punctul detectat este planul confocal.
Computerul afișează punctele detectate pe ecranul computerului sub formă de puncte de imagine. Pentru a genera o imagine completă, sistemul de scanare din calea optică scanează pe planul focal al probei pentru a genera o imagine confocală completă. Atâta timp cât scena se mișcă în sus și în jos de-a lungul axei Z, un nou strat al eșantionului este mutat în planul confocal, iar noul strat al eșantionului este imaginat pe monitor. Cu mișcarea continuă a axei Z, se pot obține imagini continue ale diferitelor straturi ale probei. Imagine tăiată ușoară.
Diferența dintre microscoapele ușoare tradiționale
Microscoapele tradiționale cu fluorescență au un neajuns de netrecut: structurile fluorescente din afara planului focal sunt neclare și estompate. Motivul este că majoritatea exemplarelor biologice au structuri suprapuse. Dacă structurile marcate fluorescent sunt distribuite la diferite niveluri și se suprapun, fluorescența împrăștiată de deasupra sau dedesubtul planului focal este primită și de lentila obiectiv, iar rezoluția microscopului cu fluorescență va fi mult îmbunătățită. reduce.
Pe baza microscoapelor optice tradiționale, microscoapele confocale cu scanare laser folosesc lumina laser ca sursă de lumină, adoptă principiul și dispozitivul de focalizare conjugată și folosesc computere pentru a efectua procesarea imaginilor digitale, observarea, analiza și ieșirea obiectelor observate. Eșantionul poate fi scanat tomografic și fotografiat pentru observarea și analiza nedistructivă a structurii spațiale tridimensionale a celulelor. În același timp, folosind etichetare imunofluorescentă și sonde de etichetare fluorescentă ionică, această tehnologie poate nu numai să observe celulele fixe și secțiunile de țesut, ci și să efectueze observarea și detectarea dinamică în timp real a structurii, moleculelor, ionilor și activităților de viață ale celulelor vii, la nivel subcelular Observarea semnalelor fiziologice precum Ca2 plus, valoarea pH-ului, potențialul membranei și modificările morfologiei celulare a devenit o nouă generație de instrumente puternice de cercetare în domeniile morfologiei, biologiei celulare moleculare, neuroștiințe, farmacologie și genetică.
