Cerințe pentru prepararea lamelor de microscop fluorescent
(1) Lamă de sticlă
Grosimea diapozitivei trebuie să fie între 0,8 și 1,2 mm. Dacă lama este prea groasă, pe de o parte, va absorbi mai multă lumină și, pe de altă parte, nu va permite luminii de excitație să se adune pe specimen. Lama de sticlă trebuie să fie netedă, uniformă ca grosime și să nu aibă fluorescență spontană evidentă. Uneori sunt necesare lame de sticlă de cuarț.
(2) Sticlă de acoperire
Grosimea geamului de acoperire este de aproximativ 0,17 mm și este netedă. Pentru a spori lumina de excitație, se poate folosi și sticlă de acoperire pentru interferență. Acesta este o sticlă de acoperire special concepută, cu mai multe straturi de substanțe (cum ar fi fluorura de magneziu) care au efecte de interferență diferite asupra luminii de diferite lungimi de undă. Poate permite fluorescenței să treacă fără probleme, în timp ce lumina de excitație prin reflexie poate excita specimenul.
(3) Exemplar
Feliile de țesut sau alte specimene nu trebuie să fie prea groase. Dacă sunt prea groase, cea mai mare parte a luminii de excitație este consumată în partea inferioară a specimenului, în timp ce partea superioară observată direct de lentila obiectiv nu este complet excitată. În plus, suprapunerea celulelor sau mascarea impurităților pot afecta judecata.
(4) Agent de etanșare
Glicerina este folosită în mod obișnuit ca agent de montare, care nu trebuie să aibă fluorescență spontană, incolor și transparent. Luminozitatea fluorescenței este relativ strălucitoare la pH 8,5-9,5 și nu este ușor de dispărut rapid. Prin urmare, un amestec egal de glicerol și tampon carbonat de 0.5mol/L cu pH 9.0-9.5 este utilizat în mod obișnuit ca agent de etanșare.
(5) Ulei pentru oglinzi
Când utilizați un microscop cu fluorescență în câmp întunecat și un microscop cu ulei pentru a observa specimenele, trebuie utilizat ulei de oglindă. Poate fi folosit ulei special de oglindă nefluorescent sau glicerol poate fi folosit ca înlocuitor. Se poate folosi și parafină lichidă, dar indicele de refracție este scăzut și are un impact ușor asupra calității imaginii.
