Avantajele și dezavantajele microscopiei cu scanare laser multifotonice
Microscopia cu scanare cu laser cu mai multe fotoni este o metodă experimentală bazată pe tehnologia microscopului cu scanare cu laser, care oferă mai multă capacitate de **secționare optică în observația 3D. Metoda de excitare a fluorescenței multifotonice folosește lungimi de undă lungi de lumină roșie sau aproape infraroșie pentru a obține imagini fluorescente de înaltă rezoluție ale specimenelor cu uciderea minimă a specimenelor active, făcând-o potrivită pentru imagistica celulelor vii, în special a țesuturilor vii groase, cum ar fi felii de creier, embrioni, organe întregi și chiar organisme întregi.
Avantajele sunt următoarele:
1, utilizarea luminii roșii sau a excitației luminii infraroșii, împrăștierea luminii este mică(împrăștierea demicparticule și lungimea de undă a celei de-a patra puteri a raportului invers).
2, nu necesită o gaură, poate colecta mai mulți fotoni împrăștiați din secțiunea transversală a imaginii.
3, pinhole nu poate distinge între fotonii împrăștiați emiși de regiunea nefocalizată sau zona focală, multi-foton în raportul semnal-zgomot al imaginii profunde este bun.
4, excitarea cu un singur foton a luminii ultraviolete sau vizibile utilizate în fascicul pentru a ajunge la planul focal înainte ca proba să fie absorbită și atenuată cu ușurință, nu este ușor de excitat profund.
5, în observarea la microscopul biologic, * primul considerent este de a nu deteriora starea activă a organismului în sine, de a menține apa, concentrația de ioni, oxigenul și circulația nutrienților. În situațiile de observare a luminii, atât energia termică, cât și cea fotonică trebuie să rămână în celulă fără a deteriora cantitatea de iradiere, energia luminoasă.
6, microscopul multifotonic are, de asemenea, multe avantaje. Cum ar fi rezoluția tridimensională, intruziunea de adâncime, în eficiența de împrăștiere, lumina de fundal, raportul semnal-zgomot, controlul etc., există microscoape laser anterioare nu au sau au incomparabil dincolo de caracteristici.
Microscopul de scanare laser confocal multi-fotoni a fost extins la diverse domenii de cercetare și aplicații. Este capabil de observarea tridimensională nedistructivă a probelor în starea lor naturală și poate îmbunătăți rezoluția și raportul semnal-zgomot al sistemului. Folosind modificarea proprietăților materialului după excitarea multi-fotoni, este, de asemenea, posibil să se realizeze stocarea tridimensională a datelor de înălțime și microfabricarea tridimensională în orice direcție, care are o valoare mare de aplicare. Se poate crede că, odată cu dezvoltarea în continuare a mașinilor, materialelor, tehnologiei laser și a altor tehnologii legate de microscopia confocală multifoton, microscopul de scanare laser confocal multifotonic va fi o dezvoltare mai mare și o aplicare mai largă.
Dezavantajele sunt următoarele:
1, doar imagini cu fluorescență.
2, dacă proba include cromofori care pot absorbi lumina de excitație, capigmenti, probapoate fi deteriorat termic.
3, rezoluția este ușor redusă, cu toate căpoate fi îmbunătățită prin utilizarea simultană a diafragmei confocale, darva exista pierdere de semnal.
4. Costul microscopiei cu scanare multifotonă este mare datorită limitării laserelor ultrarapide scumpe.
