Principiile, caracteristicile și utilizarea microscopiei cu fluorescență
Principiul și caracteristicile structurale ale unui microscop cu fluorescență: Un microscop cu fluorescență folosește o sursă de lumină punctuală cu eficiență luminoasă ridicată, care emite o anumită lungime de undă a luminii (cum ar fi lumina ultravioletă de 3650 inchi sau lumină albastră ultravioletă de 4200 inchi) printr-un sistem de filtrare a culorilor. lumină de excitație. Substanța fluorescentă din probă este excitată pentru a emite diferite culori de fluorescență și apoi este observată prin mărirea obiectivului și a ocularului. În acest fel, chiar și cu fluorescență slabă, este ușor de recunoscut și foarte sensibil pe fundaluri puternic contrastante, folosit în principal pentru studiul structurii și funcției celulelor, precum și a compoziției chimice. Structura de bază a unui microscop cu fluorescență este compusă dintr-un microscop optic obișnuit și unele accesorii (cum ar fi o sursă de lumină fluorescentă, filtru de excitație, separator de fascicul bicromatic și filtru de blocare etc.). Surse de lumină fluorescentă - folosesc de obicei lămpi cu mercur de ultra-înaltă presiune (50-200W), care pot emite lumină de diferite lungimi de undă. Cu toate acestea, fiecare substanță fluorescentă are o lungime de undă a luminii de excitație care produce cea mai puternică fluorescență, astfel încât filtrele de excitație (de obicei filtre de excitație ultraviolete, violete, albastre și verzi) trebuie adăugate pentru a permite doar o anumită lungime de undă a luminii de excitație să treacă și să se ilumineze. specimenul, absorbind în același timp orice altă lumină. După ce a fost iradiată de lumina excitată, fiecare substanță emite fluorescență vizibilă cu o lungime de undă mai mare decât iradierea într-o perioadă foarte scurtă de timp. Fluorescența are specificitate și este în general mai slabă decât lumina de excitație. Pentru a observa fluorescența specifică, în spatele lentilei obiectivului trebuie adăugat un filtru de blocare (sau de suprimare).
Are două funcții: în primul rând, absoarbe și blochează intrarea luminii de excitație în ocular pentru a evita perturbarea fluorescenței și deteriorarea ochilor; în al doilea rând, selectează și permite trecerea fluorescenței specifice, afișând o culoare specifică de fluorescență. Ambele tipuri de filtre trebuie selectate pentru a fi utilizate împreună.
