Pregătirea și observarea probelor biologice pentru microscopie electronică
Rezoluția unui microscop depinde de lungimea de undă a luminii utilizate. Microscopul electronic, care a început să apară în 1933, folosește ca sursă de lumină un fascicul de electroni cu o lungime de undă mult mai mică decât cea a luminii vizibile, astfel încât rezoluția pe care o poate obține este mult îmbunătățită în comparație cu cea a unui microscop optic. Diferența dintre sursele de lumină determină și o serie de diferențe între microscoapele electronice și microscoapele optice.
În conformitate cu diferențele dintre principiile imagistică prin fascicul de electroni și diferitele moduri de a acționa asupra probelor, microscoapele electronice moderne s-au dezvoltat în multe tipuri. În prezent, cele mai frecvent utilizate sunt microscoapele electronice cu transmisie și microscoapele electronice cu scanare. Mărirea totală a primei poate fi între 1000-1000000. Mărirea totală a acestuia din urmă poate varia între 20 și 300,000 ori. Acest experiment introduce în principal pregătirea a două tipuri de probe de microscop, microscopul electronic cu transmisie și microscopul electronic cu scanare.
2. Echipamente
1. Bacteriile Escherichia coli (Escherichia coli) înclinată.
2. Soluție sau reactiv acetat de amil, acid sulfuric concentrat, etanol absolut, apă sterilă, 2% fosfotungstat de sodiu (pH 6.5-8.0) soluție apoasă, 0,3% polietilenă soluție de formaldehidă (solubilă în cloroform), celule Pigment c, acetat de amoniu, plasmida pBR322.
3. Instrumente sau alte ustensile: microscop optic obișnuit, plasă de cupru, pâlnie de porțelan, pahar, vas, picurător steril, pensete sterile, ace, diapozitive, tablă de numărat, mașină de acoperire în vid, uscător de puncte critice etc.
3. Etape de operare
(1) Pregătirea probelor și observarea pentru microscopia electronică cu transmisie
1. Tratarea plaselor metalice
Proba pentru microscopie optică este plasată pe o lamă de sticlă pentru observare. Cu toate acestea, în microscopia electronică cu transmisie, deoarece electronii nu pot pătrunde în foaia de sticlă, materialele de plasă pot fi folosite doar ca purtători, numite de obicei plase purtătoare. Plasa purtătoare poate fi împărțită în multe specificații diferite datorită materialelor și formelor diferite, printre care cel mai frecvent utilizat este plasa de cupru 200-400 (număr de găuri). Plasa de cupru trebuie tratată înainte de utilizare pentru a îndepărta murdăria și a o menține curată, altfel va afecta calitatea filmului suport și claritatea fotografiilor specimen. Acest experiment folosește o plasă de cupru 400-, care poate fi tratată după cum urmează: mai întâi, înmuiați și albiți-o cu acetat de amil timp de câteva ore, apoi clătiți-o cu apă distilată de mai multe ori și apoi înmuiați-o în etanol absolut pentru deshidratare. Dacă plasa de cupru încă nu este curată după metodele de mai sus, o puteți înmuia în acid sulfuric concentrat diluat (1:1) timp de 1 până la 2 minute sau o puteți fierbe în soluție de NaOH 1% timp de câteva minute, clătiți-o cu distilat. udați de mai multe ori, apoi puneți-l în anhidru Deshidratați în etanol și lăsați-l deoparte.
2. Pregătirea membranei suport
La observarea probelor, plasa purtătoare trebuie acoperită și cu un strat de peliculă uniformă, nestructurată, altfel probele mici se vor scurge din orificiile plasei purtătoare. Acest film este de obicei numit film suport sau film purtător. Filmul suport ar trebui să fie transparent la electroni, iar grosimea sa ar trebui să fie în general mai mică de 20 nm; sub impactul fasciculului de electroni, filmul ar trebui să aibă și o anumită rezistență mecanică pentru a menține stabilitatea structurală și a avea o conductivitate termică bună; în plus, rețeaua de suport trebuie utilizată în microscopia electronică. Nu trebuie să existe nicio structură vizibilă dedesubt, nicio reacție chimică cu proba transportată și nicio interferență cu observarea probei. Grosimea sa este în general de aproximativ 15 nm. Filmul de susținere poate fi folie de plastic (cum ar fi film de colodion, film de polietilenă formaldehidă etc.), film de carbon sau film metalic (cum ar fi film de beriliu etc.). În condiții normale de lucru, folie de plastic poate îndeplini cerințele. Printre filmele de plastic, filmul de colodion este relativ ușor de preparat, dar rezistența sa nu este la fel de bună ca filmul de polietilenă formaldehidă.
