PH-metru - Determinarea si reglarea pH-ului mediu
Toate microorganismele sunt afectate de pH-ul mediului în care trăiesc. Adesea, prezența speciilor selective îngustează intervalul de pH în care cresc. Uneori, aciditatea sau alcalinitatea mediului poate acționa și ca factor de selecție a creșterii. Pentru mediile de testare biochimice, totuși, intervalul de pH în care microorganismele prezintă activitate tk în substrat este mai îngust decât intervalul de pH necesar pentru creștere: prin urmare, este important să ajustați pH-ul mediului la intervalul așteptat. Când laboratorul pregătește mediul conform compoziției mediului, pH-ul trebuie verificat și ajustat. Trebuie subliniat că chiar și pentru mediul deshidratat sintetic gata preparat furnizat de producător (în special pentru un mediu deshidratat stoc), pH-ul final trebuie măsurat după realizarea mediului experimental.
Cel mai precis mod de a măsura pH-ul unui mediu este cu un pH-metru. Înainte de utilizare, acesta trebuie calibrat cu o soluție tampon standard de pH cunoscut (de obicei, pH-ul este de 4 până la 7). Clătiți electrodul pH-metrului cu apă distilată și scufundați-l în mediul de cultură în pahar, apoi citiți pH-ul mediului de cultură de pe scara pH-metrului. Fiecare producător oferă instrucțiuni detaliate de utilizare pentru fiecare tip de pH-metru.
La prepararea mediului de cultură, PH-ul poate fi ajustat cu ușurință folosind un pH-metru cu agitare mecanică. Mediul de cultură trebuie preparat într-un recipient (cum ar fi un pahar mare) care poate fi agitat continuu. sau magneți înveliți în teflon. pH-ul mediului care conține agar trebuie ajustat după decongelare, ceea ce se face cu ușurință cu un agitator magnetic încălzit. Când reglați pH-ul, utilizați mai întâi o soluție tampon standard de pH cunoscut pentru a calibra pH-metrul. Apoi puneți electrodul compozit și termometrul de rezistență (dacă există) în mediu, adăugați încet cantitatea adecvată de acid clorhidric și hidroxid de sodiu de la capătul paharului departe de electrod, astfel încât mediul să poată atinge și menține pH-ul necesar.
Compensarea temperaturii pH-metrului trebuie să țină cont de efectul temperaturii asupra sistemului de electrozi: în unele diluții și medii, pH-ul se modifică considerabil cu temperatura. Pentru medii lichide și diluții, pH-ul poate fi de obicei ajustat și măsurat fie la 25 de grade, fie la temperatura la care sunt utilizate.
pH-ul mediului de agar trebuie ajustat după dizolvare, iar temperatura de dizolvare este peste 45 de grade: prin urmare, pH-ul mediului solid trebuie determinat la temperatura de utilizare. În acest moment, trebuie utilizat un electrod compozit cu cap plat, iar compensarea temperaturii pH-metrului trebuie calibrată manual. La prepararea mediului de cultura, daca se determina ca pH-ul mediului de cultura este diferit intre starea de topire si starea de solidificare, inseamna ca exista o eroare in ajustarea pH-ului.
De asemenea, atunci când mediul preparat este sterilizat la căldură (de exemplu, autoclavat), acesta poate suferi, de asemenea, modificări ale pH-ului. Pentru mediul deshidratat, producătorul a luat în considerare acest lucru și, de obicei, nu este necesară ajustarea pH-ului, dar pH-ul mediului care urmează să fie utilizat trebuie verificat cu atenție. Dacă pH-ul mediului de agar deshidratat trebuie ajustat în timpul redizolvării sau preparării, cel mai bine este să îl ajustați cu acid clorhidric sterilizat prin filtrare și soluție de hidroxid de sodiu după etapa de sterilizare pentru a evita formarea supraîncălzirii mediului. Când se prepară medii cu diferite materii prime sau produse farmaceutice, pH-ul mediului trebuie verificat după autoclavare. În plus, dacă se constată că pH-ul mediului se schimbă la fel după fiecare autoclavă, pH-ul poate fi ajustat corespunzător la prepararea mediului. Cu toate acestea, este încă necesar să se determine pH-ul final al mediului după sterilizare.
