Cerințe privind grosimea microscopului optic pentru lamele de sticlă
Deshidratare microscopică și atașare a probei: Din cauza centrifugării repetate, celulele se pierd, așa că cel mai bine este să atașați celulele la suprafața unei lame de sticlă sau a unei foi de plastic pentru microscopie optică, astfel încât celulele să fie deshidratate și uscate împreună cu sticla. tobogan sau folie de plastic. Cerințe pentru grosimea lamelor de sticlă în microscopia optică Pentru a permite celulelor să se atașeze la lamele de sticlă sau foile de plastic, este necesar să se așeze mai întâi un strat de film pe lamele de sticlă sau foile de plastic. Metoda de așezare a filmului este următoarea:
(1) Cea mai simplă metodă pentru microscopia optică este așezarea unui strat subțire de film polivinil formal (formvar). Înmuiați lamelele curățate în (0.5-1) procente de soluție de cloroform polivinil formal. După ce atmosfera se volatilizează, pe diapozitive apare o peliculă albă. Agitați diapozitivele de mai multe ori în cloroform pentru a se schimba filmul. Subțire și gata de utilizare.
(2) Puneți 0.1 latitudine poli-L-lizină (dizolvați 1 mg polilizină în 1 ml apă filtrată în timpul preparării) pe lama de sticlă curățată și puneți-o într-o cutie de alimentare la 450C după ce picătura se desfășoară . uscat. Această metodă este cea mai bună deoarece poli-L-lizina este încărcată pozitiv, permițând atașarea mai multor celule încărcate negativ la suprafață.
(3) Adăugați plasmă și glicerol în apa distilată în proporție de (30--40) procente și (3-5) procente conform cerințelor microscopului optic pentru grosimea lamei pentru a forma o proteină de glicerol soluţie. Lichidul este scăpat pe lama de sticlă curățată, desfășurat și uscat la microscopul optic. Filmul proteic așezat este scufundat în glutaraldehidă 2% pentru a fixa proteina, spălat și uscat pentru utilizare ulterioară. Înainte de utilizare, plasma este scăpată pe filmul proteic. Faceți-o „activată”, clătiți cu tampon după 30 de minute și poate fi aplicată direct.
Celulele fixate și curățate sunt transformate într-o concentrație adecvată de suspensie celulară cu apă filtrată sub un microscop digital, iar microscopul optic este plasat pe o lamă de sticlă sau folie de plastic care a fost acoperită cu o membrană și plasată într-un loc umed, scăzut. temperatura (40C) mediu (30-120) minute pentru a permite celulelor să se atașeze de membrană. Folosiți o pensetă fină pentru a ridica lama de sticlă și agitați-o în apă curată dublu distilată și spălați celulele neatașate cu un microscop optic. Cerințe pentru grosimea lamelor în microscoapele optice Microscoapele polarizante sunt apoi plasate rapid într-un vas umplut cu 50% acetonă (sau etanol). Procesul de deshidratare este de a pune lamele în acetonă sau etanol cu o concentrație crescândă la fiecare 3 minute, iar microscopul optic sau creșterea continuă a concentrației de agent de deshidratare în recipientul de lame de sticlă. Conform experienței de laborator a autorului, această din urmă operație este mai convenabilă. Metoda specifică de microscopie optică poate aspira jumătate din agentul de deshidratare din recipient la fiecare 3 minute și apoi poate adăuga o cantitate egală de agent de deshidratare cu o concentrație de 100%. După operații 5-6, concentrația agentului de deshidratare în vasul de preț al microscopului atinge peste 0,5 la sută și celulele sunt deshidratate cu succes. După uscare în punctul critic, lama de sticlă sau foaia de plastic este lipită de pilonul de probă cu adeziv conductor pentru acoperirea metalului. Există, de asemenea, facilități pentru atașarea celulelor la membranele stabilite prin a treia metodă. Microscopul optic poate atârna celulele fixate prin concentrație scăzută de glutaraldehidă pe filmul proteic „activat”. Microscopul optic necesită ca grosimea lamei de sticlă să fie plasată timp de 10 minute, iar lama de sticlă sau foaia de plastic este înmuiată în glutaraldehidă 2%. După 30 de minute, clătiți cu apă dublu distilată filtrată, apoi deshidratați, uscați și acoperiți cu metal conform metodei de mai sus.
