Sala de clasă de imagistică microscopică丨Microscop cu fluorescență cu câmp larg
În aplicațiile de imagistică cu celule vii, microscopia cu fluorescență cu câmp larg facilitează observarea dinamicii celulelor aderente crescute în camere specifice de mediu plasate pe scena microscopului. În configurația sa cea mai de bază, un microscop standard de cultură de țesut inversat echipat cu iluminare cu fluorescență EPI este cuplat cu un sistem de detectare a matricei de zonă (de obicei o cameră CCD), filtre de fluorescență adecvate și un sistem obturator pentru a limita expunerea excesivă a celulelor la lumina de excitare dăunătoare. . Microscopia cu fluorescență de bază se bazează pe filtre de interferență atent adaptate pentru a selecta lățimi de bandă specifice pentru iluminare și detectarea luminii emise. Sursele de lumină includ lămpi cu arc cu mercur, xenon și cu halogenuri metalice, sisteme laser cu extindere a fasciculului și diode emițătoare de lumină (LED-uri), toate care necesită specificații diferite ale filtrului. Fluoroforele sintetice utilizate în microscopia cu fluorescență au spectre de emisie care acoperă regiunile aproape ultraviolete, vizibile și infraroșu apropiat. Utilizarea proteinelor fluorescente codificate genetic a extins foarte mult capacitățile microscopiei cu fluorescență în imagistica cu celule vii, permițând cercetătorilor să vizeze cu precizie regiunile subcelulare de interes.
Nuohai LS 18, un nou tip de microscop cu iluminare cu foi de lumină dezvoltat independent de Nuohai, este special conceput pentru imagini 3D de înaltă rezoluție a mostrelor de țesut mari transparente și este dedicat explorării diferitelor țesuturi intacte, cum ar fi creierul, splina, intestinul subțire. , rinichi, plămâni, inimă și tumoră. Structura precisă 3D a organelor.
În fluorescența cu câmp larg, emisia cu deschidere completă colectată de obiectivul microscopului maximizează semnalul înregistrat, minimizând în același timp timpul de expunere necesar. Astfel, mostrele pot fi fotografiate cu perioade de lumină foarte scurte. Principalul dezavantaj al imaginilor cu câmp larg este că fluorescența din regiunile departe de planul focal, precum și semnalul de fundal, este lumină nedorită care ascunde adesea caracteristicile de interes. Prin urmare, imagistica cu câmp larg oferă cele mai bune rezultate atunci când caracteristicile de interes sunt mari (cum ar fi organele) sau foarte punctate în natură. O mare varietate de probe de celule vii, inclusiv celule aderente, bacterii, drojdie și secțiuni de țesut foarte subțire, sunt candidații ideali pentru imagistica cu fluorescență cu câmp larg, cu toate acestea, țesuturile mai groase (peste 5 microni) sunt cel mai bine utilizate cu imagistica cu metode mai avansate.
Deși au existat multe progrese în imagistica fluorescentă cu coloranți fluorescenți sintetici, puncte cuantice și proteine fluorescente, în unele cazuri este utilă combinarea fluorescenței cu alte modalități de imagistică. Ca exemplu, DIC poate fi utilizat împreună cu fluorescența cu câmp larg pentru a monitoriza viabilitatea celulelor și morfologia generală în timp ce se studiază fenomenele de interes pentru ținte etichetate specifice. Obținerea DIC și fluorescența într-o singură imagine este de obicei nepractică, dar într-un microscop configurat corespunzător cele două tehnici pot fi utilizate secvenţial. Astfel, după imagistica în modul epifluorescență, imaginile DIC pot fi achiziționate din probe marcate fluorescent folosind lumina transmisă. Cele două imagini pot fi îmbinate în timpul post-analizei. Achiziția simultană de imagini DIC și fluorescență este posibilă în configurațiile avansate ale microscopului cu câmp larg folosind iluminare separată spectral (cum ar fi vizibil și infraroșu apropiat) și adaptoare pentru camere duble sau cu vedere divizată. În majoritatea microscoapelor confocale cu scanare laser, imaginile pot fi achiziționate în ambele moduri de fluorescență și DIC simultan, eliminând necesitatea procesării post-achiziție. Contrastul de fază și contrastul de modulație Hoffman pot fi, de asemenea, utilizate împreună cu microscopia cu fluorescență cu câmp larg. Cu toate acestea, în aceste tehnici, obiectivul este special, fie că este un inel de fază sau o placă de modulație Hoffman, va cauza o pierdere a intensității emisiei de 5-15 procente.
Link articol: Instrument Equipment Network https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
