Măsurarea cantității microbiene - Metoda microscopică de numărare directă!
Creșterea populațiilor bacteriene se caracterizează printr-o creștere a numărului de celule sau o creștere a materialului celular. Există mai multe metode de măsurare a numărului de celule, inclusiv numărarea microscopică directă, numărul plăcilor, turbometria prin spectrofotometru, numărul cel mai probabil MPN și filtrarea pe membrană. Metodele de măsurare a substanțelor celulare includ măsurarea greutății celulare uscate, măsurarea conținutului anumitor componente ale celulelor, cum ar fi azotul, ARN-ul și ADN-ul și măsurarea produselor metabolice. În rezumat, există multe metode de măsurare a creșterii microbiene, fiecare cu propriile avantaje și dezavantaje, iar selecția ar trebui să se bazeze pe cerințe specifice în lucrare. Acest experiment introduce în principal metoda de numărare directă la microscop utilizată în mod obișnuit în activitatea de producție și cercetare științifică.
Cerințe de scop
1. Clarificați principiul utilizării unei plăci de numărare a celulelor sanguine pentru numărare.
2. Stăpânește metoda de utilizare a unei plăci de numărare a celulelor sanguine pentru numărarea microbilor.
2, Principii de bază
Metoda microscopică de numărare directă este o metodă simplă, rapidă și intuitivă de numărare directă a unei cantități mici de suspensie a unei probe la microscop prin plasarea acesteia pe o lamă specială de sticlă cu o anumită zonă și volum (cunoscută și sub numele de contor bacterian). În prezent, dispozitivele de numărare a bacteriilor utilizate în mod obișnuit în țară și în străinătate includ plăcile de numărare a celulelor sanguine, dispozitivele de numărare a bacteriilor Peteroff Hauser și dispozitivele de numărare a bacteriilor Hawksley, toate putând fi utilizate pentru numărarea suspensiilor de drojdie, bacterii, spori fungici etc., cu același principiu de bază. Ultimele două tipuri de contoare bacteriene au un volum total de {{0}},02mm3 după ce au fost acoperite cu un capac de sticlă, iar distanța dintre capacul de sticlă și diapozitivul suport este de numai 0,02mm. Prin urmare, un obiectiv de imersie în ulei poate fi utilizat pentru a observa și a număra celule mai mici, cum ar fi bacteriile. Pe lângă utilizarea acestor contoare bacteriene, există și o metodă de estimare pentru observarea directă a raportului dintre suprafața de frotiu și suprafața câmpului la microscop, care este în general utilizată pentru examinarea bacteriologică a laptelui. Avantajele numărării directe cu un microscop sunt intuitive, rapide și ușor de utilizat. Dar dezavantajul acestei metode este că rezultatele măsurate sunt de obicei suma celulelor moarte și vii. În prezent, există unele metode care pot depăși acest dezavantaj, cum ar fi combinarea culturii camerei de colorare a celulelor vii (timp scurt) și adăugarea de inhibitori ai diviziunii celulare pentru a atinge obiectivul de a număra doar celulele vii.
Utilizarea unei plăci de numărare a celulelor sanguine ca exemplu pentru numărarea directă la microscop. Metodele de utilizare ale celorlalte două contoare bacteriene pot fi găsite în manualele diferiților producători. Numărarea directă la microscop folosind o placă de numărare a celulelor sanguine este o metodă frecvent utilizată pentru numărarea microbilor. Tabla de numărare este o lamă de sticlă special realizată, cu patru caneluri care formează trei platforme pe ea; Platforma mai lată din mijloc este împărțită în două jumătăți printr-o canelură orizontală scurtă și există o grilă pe fiecare parte a platformei. Fiecare grilă este împărțită în nouă grile mari, iar grila mare din mijloc este camera de numărare. Structura plăcii de numărare a celulelor sanguine este prezentată în Figura l{{0}}. Scara camerei de numărare are în general două specificații. Unul este că un pătrat mare este împărțit în 25 de pătrate din mijloc, iar fiecare pătrat este împărțit în continuare în 16 pătrate mici (Figura 15-2); O altă metodă este de a împărți un pătrat mare în 16 pătrate din mijloc, iar fiecare pătrat este împărțit în continuare în 25 de pătrate mici. Cu toate acestea, indiferent de dimensiunea tablei de numărare, există 400 pătrate mici în fiecare pătrat mare. Dacă lungimea laturii fiecărui pătrat este de 1 mm, aria fiecărui pătrat mare este lmm2. După acoperirea cu un capac de sticlă, înălțimea dintre capacul de sticlă și lamă este de 0,1 mm, deci volumul camerei de numărare este de 0,1 mm3 (o miime de mililitru). Figura 15-1 Structura panoului de numărare a celulelor sanguine (I) Figura 15-2 Structura panoului de numărare a celulelor sanguine (II) A Vedere frontală; B. Vedere în secțiune verticală; Grila mărită are un pătrat mare în mijloc ca sala de numărare 1. Tabla de numărare a celulelor sanguine; 2. Geam de acoperire; Când se numără în camera de numărare, numărul total de bacterii este de obicei calculat pentru cinci pătrate, apoi se obține valoarea medie a fiecărui pătrat, înmulțită cu 25 sau 16 pentru a obține numărul total de bacterii într-un pătrat mare, care este apoi convertit în numărul total de bacterii în soluția bacteriană lml. Presupunând că numărul total de bacterii din cinci grile pătrate este A și factorul de diluție al soluției bacteriene este B. Dacă există 25 de plăci de numărare în grila pătrată, numărul total de bacterii în 1 ml de soluție bacteriană este A/5 × 25 × 104 × B=50000A · B. În mod similar, dacă există 16 plăci de numărare în grila pătrată, numărul total de bacterii în 1 ml de soluție bacteriană este A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
