Beneficii îmbunătățite ale microscopiei multifotonice cu scanare laser
Microscopia multifotonă cu scanare laser este o îmbunătățire majoră a microscopiei optice, în principal pentru observarea structurii profunde a celulelor vii, a celulelor fixe și a țesuturilor și poate obține structuri clare și clare cu mai multe straturi din planul Z, adică felii optice și poate construi Structura solidă tridimensională a specimenului. Microscopul confocal folosește o sursă de lumină laser, care este extinsă pentru a umple întregul plan focal posterior al lentilei obiectivului și apoi converge într-un punct foarte mic pe planul focal al specimenului prin sistemul de lentile al lentilei obiectiv. În funcție de deschiderea numerică a obiectivului, diametrul celui mai strălucitor punct de iluminare este de aproximativ 0.25 ~ 0.8 μm, iar adâncimea este de aproximativ 0}.5 ~ 1.5 μm. Dimensiunea spotului confocal depinde de designul microscopului, lungimea de undă laser, caracteristicile lentilei obiectiv, setarea stării unității de scanare și natura specimenului. Microscoapele de câmp au o gamă și o adâncime mare de iluminare, în timp ce microscoapele confocale au iluminare concentrată la un punct focal pe planul focal. Cel mai de bază avantaj al microscopiei confocale este că poate efectua secționarea optică fină a specimenelor fluorescente groase (până la 50 μm sau mai mult), cu o grosime de aproximativ 0,5 până la 1,5 μm. O serie de imagini secțiuni optice pot fi obținute prin deplasarea specimenului în sus și în jos cu motorul pas cu axa Z al microscopului. Achiziția informațiilor despre imagine este controlată într-un plan precis și nu va fi interferată de semnale din alte locații de pe specimen. După eliminarea efectului fluorescenței de fundal și creșterea raportului semnal-zgomot, contrastul și rezoluția imaginilor confocale sunt îmbunătățite semnificativ în comparație cu imaginile tradiționale cu fluorescență cu iluminare de câmp. În multe specimene, multe componente structurale complicate sunt împletite pentru a forma sisteme complexe, dar odată ce se pot colecta suficiente secțiuni optice, le putem reconstrui în 3D prin software. Această abordare experimentală a fost utilizată pe scară largă în cercetarea biologică pentru a elucida relațiile complexe structurale și funcționale dintre celule sau țesuturi.
