Metode de imagistică pentru câmpurile luminoase și întunecate ale microscopiei cu fluorescență
(1) Imagistica în câmp luminos (BFI), care permite doar electronilor transmisi în regiunea paraxială să treacă prin deschiderea obiectivului, formând o imagine întunecată pe un fundal luminos. Cu cât deschiderea obiectivului este mai mică, cu atât contrastul imaginii câmp luminos este mai mare; (2) Imagistica în câmp întunecat (DFI), care permite doar unei porțiuni dintr-un fascicul împrăștiat cu unghi mare sau unui fascicul de difracție al unui cristal să treacă prin deschiderea lentilei obiectivului, blocând în același timp fasciculul transmis. Acest lucru creează o imagine grafică strălucitoare pe un fundal întunecat. Această metodă de imagistică în câmp întunecat poate îmbunătăți contrastul imaginilor și este o metodă importantă de imagistică.
Există aproximativ patru metode pentru microscopia cu fluorescență pentru a obține imagini în câmp întunecat: (1) menținerea iluminării verticale de-a lungul axei optice în timp ce se mișcă deschiderea obiectivului; (2) Utilizarea iluminării oblice pentru a obține fascicule împrăștiate în direcția axei optice se numește Center Dark Field Imaging (CDFI); (3) O deschidere a obiectivului cu o blocare a fasciculului central și o zonă circulară transparentă; (4) Folosiți un reflector circular transparent pentru a detecta lumina și o deschidere a obiectivului cu o gaură circulară centrală. Metodele * aici sunt simple și convenabile, dar folosesc imagini electronice în regiunea îndepărtată a mânecii, rezultând aberații mari și calitate slabă a imaginii. A doua metodă poate evita dezavantajele de mai sus, dar deschiderea obiectivului microscopului cu fluorescență Leica primește doar o mică parte de electroni difracți împrăștiați, rezultând o eficiență mai scăzută. Partea diafragmei este adesea bombardată de un număr mare de electroni, ceea ce poate provoca cu ușurință poluare asimetrică și poate afecta calitatea imaginii. Obiectivul circular a fost îmbunătățit în acest sens, dar dezavantajul este că este dificil de realizat și este dificil de realizat o simetrie axială completă. Având în vedere cerințele relativ relaxate pentru sistemul de iluminat, poate fi adoptată ultima soluție, care implică adăugarea unei deschideri circulare la condensator pentru a asigura o iluminare goală pentru eșantion. Efectul acestui dispozitiv. Rezoluția sa de imagine poate fi apropiată de cea a imaginilor cu câmp luminos, în timp ce contrastul este mult îmbunătățit.
