Cum poți alege microscopul confocal potrivit pentru tine? Există vreo metodă specifică?
Microscopia confocală are mai multe avantaje decât microscopia cu câmp larg. Microscopia confocală poate face secţionare optică continuă a probelor şi poate exclude interferenţa semnalului din planurile non-focale. Din acest motiv, aplicarea microscopiei confocale este într-adevăr mai frecventă. Cu toate acestea, pe piață există tot mai multe microscoape confocale. Cum să alegi?
Microscopia confocală are mai multe avantaje decât microscopia cu câmp larg. Microscopia confocală poate realiza secțiuni optice continue ale probelor și poate exclude interferența semnalului din planurile nefocale. Din acest motiv, microscopia confocală este într-adevăr mai frecventă. Cu toate acestea, pe piață există tot mai multe microscoape confocale. Cum să alegi? Atunci când alegeți un microscop confocal, există două considerații de bază și importante: tipul de probă pe care doriți să o studiați (de exemplu, celule fixe sau vii) și tipul de analiză pe care doriți să-l efectuați (de exemplu, procese celulare statice sau dinamice).
Imagistica confocală a celulelor fixe
Pentru imaginea celulelor sau țesuturilor fixate și colorate, alegem în general scanarea laser confocală (LSCM). Acest lucru se datorează în principal faptului că celulele moarte fixe nu au evenimente biologice rapide în celulele vii și pot beneficia mai bine de rezoluția spațială mai mare a LSCM. Imagistica LSCM este de a tăia optic proba cu laser, iar viteza de scanare (în funcție de viteza oglinzii matricei de scanare) este în general de 1 fps. Timpii de expunere mai lungi înseamnă un risc mai mare de fotoalbire, dar pentru celulele moarte fixe timpul nu este critic și putem face o medie prin realizarea mai multor fotografii.
Imagistica confocală a celulelor vii
Imaginirea celulelor vii necesită protecție suplimentară față de mediile neprietenoase. Când imaginăm, primul nostru aspect este să menținem viabilitatea și sănătatea celulelor. Elementele de încălzire cu temperatură constantă și sistemele de perfuzie sunt esențiale, în special pentru studiile time-lapse. Evenimentele biochimice rapide care controlează starea fiziologică a celulelor vii sunt ceea ce majoritatea oamenilor doresc să studieze, dar aceste evenimente sunt prea rapide pentru LSCM convențional. În plus, expunerea prelungită la LSCM a indus, de asemenea, leziuni toxice ale luminii celulelor. Prin urmare, imagistica celulelor vii necesită microscoape confocale speciale.
Există, în general, două opțiuni pentru imagistica confocală a celulelor vii: confocale cu scanare laser cu scanare rapidă și confocale cu disc rotativ. Microscopia confocală cu scanare rapidă înlocuiește oglinzile galvanometre mai lente cu oglinzi de scanare rezonante mai rapide, permițând viteze de scanare de până la 30 fps; în timp ce confocalele cu disc rotativ (SDCM) au avantajul unei scanări mai rapide (deși inevitabil la o rezoluție spațială redusă), viteza sa poate ajunge teoretic la 2000 fps (în practică este adesea limitată de alți factori).
Dacă sunteți îngrijorat de fotoalbirea sau semnalul de fluorescență foarte slab, atunci SDCM poate fi mai potrivit. SDCM folosește două discuri rotative cu microgodeuri aranjate pentru a dispersa lumina de excitație. Spre deosebire de LSCM, care scanează spotul de probă, SDCM dobândește mai multe pete simultan (aproximativ 100 de puncte de pixeli), astfel încât viteza este mult crescută, iar fotoalbirea SDCM și mai puțină fototoxicitate. Cu toate acestea, puteți utiliza și confocale de scanare rapidă pentru a crește viteza de scanare, combinate cu detectoare extrem de sensibile și pentru a reduce energia luminii de excitație pentru a reduce fototoxicitatea, care poate menține funcțiile bogate ale confocalelor tradiționale.
Sistem automat de imagistică confocală
Unii cercetători le place să găsească modalități de a modifica microscopul pentru a se potrivi nevoilor lor individuale. Și unii cercetători nici măcar nu sunt interesați de modul în care funcționează efectiv microscoapele. Pentru cei din urmă, un microscop confocal automat poate fi mai pe placul lor. De exemplu, Olympus FluoViewFV10i este un microscop confocal laser 4-de birou complet automat. Structura sa integrată compactă nu necesită aproape niciun spațiu de instalare. Acest tip de instrument este ideal pentru cercetătorii care trebuie să facă o mulțime de achiziții de date de imagine în fiecare zi, dar, desigur, nu reflectă pe deplin funcționalitatea și flexibilitatea confocalelor tradiționale. În plus, NikonA1 este, de asemenea, un sistem confocal complet automat. La fel ca majoritatea microscoapelor de scanare confocale convenționale, NikonA1 folosește un cap de scanare galvanometru, care are o rezoluție mai mare decât A1R cu un cap de scanare hibrid, dar o viteză puțin mai mică (A1R ~30fps)
