Metoda de detectare prin microscopie fluorescentă
microscop cu fluorescență
Microscopia cu fluorescență este un instrument fundamental pentru citochimia imunofluorescenței. Este compus din componente principale, cum ar fi sursa de lumină, sistemul cu plăci de filtrare și sistemul optic. Utilizează o anumită lungime de undă a luminii pentru a excita specimenul și pentru a emite fluorescență, care este mărită printr-un sistem de obiectiv și ocular pentru a observa imaginea de fluorescență a specimenului (Figura 1).
(1) Sursă de lumină
În zilele noastre, o lampă cu mercur de ultra-înaltă presiune de 200 W este folosită în mod obișnuit ca sursă de lumină. Este realizat din sticla de cuart, cu forma sferica in mijloc si o anumita cantitate de mercur umpluta in interior. În timpul funcționării, descărcarea dintre cei doi electrozi face ca mercurul să se evapore, iar presiunea din interiorul sferei crește rapid. Când mercurul se evaporă complet, poate atinge 50-70 presiuni atmosferice standard, care durează în general aproximativ 5-15 minute. Luminescența lămpilor cu mercur de ultra-înaltă presiune este rezultatul descărcării dintre electrozi, care disociază și reduce continuu moleculele de mercur și emite fotoni. Emite lumină ultravioletă puternică și albastră violetă, care este suficientă pentru a excita diferite substanțe fluorescente, prin urmare, este utilizat pe scară largă în microscoapele cu fluorescență.
Precauții pentru utilizarea unui microscop cu fluorescență
(1) Urmați cu strictețe instrucțiunile fabricii de microscop cu fluorescență și nu modificați programul în mod arbitrar.
(2) Inspecția trebuie efectuată într-o cameră întunecată. După ce intri în camera întunecată, conectează alimentarea și aprinde lampa cu mercur de ultra-înaltă presiune timp de 5-15 minute. După ce sursa de lumină emite lumină puternică și se stabilizează, ochii ar trebui să se adapteze complet la camera întunecată înainte de a începe să observe specimenul.
(3) Pentru a preveni deteriorarea ochilor UV, trebuie purtați ochelari de protecție atunci când reglați sursa de lumină.
(4) Timpul de inspecție ar trebui să fie de 1-2 ore de fiecare dată. Dacă depășește 90 de minute, intensitatea luminoasă a lămpii cu mercur de ultraînaltă presiune scade treptat și fluorescența slăbește; Specimenele expuse la radiații ultraviolete timp de 3-5 zile
După min, și fluorescența a scăzut semnificativ; Deci, durata maximă nu trebuie să depășească 2-3 ore.
(5) Durata de viață a sursei de lumină fluorescentă a microscopului este limitată, iar specimenul trebuie examinat central pentru a economisi timp
Economisiți timp și protejați sursa de lumină. Când vremea este caldă, trebuie adăugat un ventilator electric pentru a disipa căldura și a se răci. Când înlocuiți un bec nou, timpul de utilizare trebuie înregistrat de la început. Când lumina este stinsă și doriți să o utilizați din nou, trebuie să așteptați ca becul să se răcească suficient înainte de a-l aprinde. Evitați să aprindeți sursa de lumină de mai multe ori pe zi.
(6) Observați specimenul imediat după colorare, deoarece fluorescența se va slăbi treptat în timp. Dacă specimenul este depozitat într-o pungă de plastic din polietilenă la 4 grade, poate întârzia timpul de atenuare a fluorescenței și poate preveni evaporarea agentului de montare.
(7) Criteriile de judecată pentru luminozitatea fluorescenței sunt în general împărțite în patru niveluri, și anume „unul” - lipsă sau fluorescență slabă vizibilă. "+" - Numai fluorescența vizibilă este vizibilă. ++- Vizibil cu fluorescență strălucitoare. „+++” - Fluorescență vizibilă și orbitoare.
