Diferențe între microscopie fluorescentă și microscopie confocală
Microscop fluorescent
1.. Microscopul de fluorescență folosește lumina ultravioletă ca sursă de lumină pentru a iradia obiectul inspectat, determinându -l să emită fluorescență și apoi să observe forma și poziția obiectului sub microscop. Microscopia fluorescentă este utilizată pentru a studia absorbția, transportul, distribuția și localizarea substanțelor în celule. Unele substanțe din celule, cum ar fi clorofila, pot fluoresce atunci când sunt expuse la radiații ultraviolete; Există, de asemenea, unele substanțe care nu pot emite ei înșiși fluorescență, dar pot emite, de asemenea, fluorescență dacă este colorată cu coloranți fluorescenți sau anticorpi fluorescenți și iradiați cu lumină ultravioletă. Microscopia fluorescentă este unul dintre instrumentele pentru cercetarea calitativă și cantitativă asupra acestor substanțe.
2. Principiul microscopului de fluorescență:
(A) Sursa de lumină: Sursa de lumină emite lumina diferitelor lungimi de undă (de la ultraviolete la infraroșu).
(B) Sursa de lumină a filtrului de excitație: transmiterea luminii unei lungimi de undă specifice care poate provoca fluorescență în eșantion, blocând în același timp lumina care este inutilă pentru fluorescența interesantă.
(C) Eșantioane fluorescente: de obicei colorate cu pigmenți fluorescenți.
(D) Filtru de blocare: transmite selectiv fluorescență prin blocarea luminii de excitație care nu este absorbită de eșantion, iar unele lungimi de undă din fluorescență sunt, de asemenea, transmise selectiv. Un microscop care folosește lumina ultravioletă ca sursă de lumină pentru ca obiectul iluminat să emită fluorescență. Microscopul electronic a fost asamblat pentru prima dată de Knorr și Haruska la Berlin, Germania în 1931. Acest microscop folosește fascicule de electroni de mare viteză în loc de grinzi ușoare. Datorită lungimii de undă mult mai scurte a debitului de electroni în comparație cu undele de lumină, mărirea unui microscop electronic poate atinge de 8 0 0000 de ori, cu o limită de rezoluție minimă de 0,2 nanometri. Microscopul electronic de scanare, care a fost folosit pentru prima dată în 1963, permite oamenilor să vadă structurile minuscule pe suprafața obiectelor.
3. Domeniul de aplicare: utilizat pentru a mări imagini cu obiecte mici. Utilizat în general pentru observații de biologie, medicamente, particule microscopice etc.
Microscop confocal
1. Microscopul confocal adaugă o jumătate de lentilă semi -reflectorizantă la calea de lumină reflectată, care deviază lumina reflectată care a trecut prin lentilă în alte direcții. În punctul său focal, există un deflector cu o gaură situată în punctul focal, iar în spatele defecțiunii se află un tub fotomultiplicator. Se poate imagina că lumina reflectată înainte și după focalizarea luminii de detectare nu poate fi concentrată pe gaura mică prin acest sistem confocal și va fi blocată de defecțiune. Deci fotometrul măsoară intensitatea luminii reflectate în punctul focal.
2. Principiul: Microscopele optice tradiționale folosesc surse de lumină de câmp, iar imaginea fiecărui punct de pe specimen este afectată de difracție sau de lumină împrăștiată din punctele vecine; Microscopul confocal cu scanare laser folosește un fascicul laser pentru a lumina o gaură și a forma o sursă de lumină punctuală pentru a scana fiecare punct de pe planul focal al eșantionului. Punctul iluminat de pe eșantion este imaginat la pinul de detectare și este primit punct după punct sau linie de un tub fotomultiplicator (PMT) sau un dispozitiv de cuplare la rece (CCCD) după detectarea pinului, formând rapid o imagine fluorescentă pe ecranul monitorului computerului. Golul de iluminare și pinul de detectare sunt conjugate în raport cu planul focal al obiectivului obiectiv. Punctele de pe planul focal sunt concentrate simultan pe gaura de iluminare și gaura de emisie, iar punctele din afara planului focal nu vor fi imaginate la pinul de detectare. Imaginea confocală rezultată este secțiunea optică a eșantionului, depășind dezavantajul imaginilor încețoșate în microscoape generale.
